BD Bromcresol Purple Lactose Agar
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GEBRAUCHSANWEISUNG – GEBRAUCHSFERTIGE PLATTENMEDIEN PA-256501.06 Rev.: Nov 2012 BD Bromcresol Purple Lactose Agar VERWENDUNGSZWECK BD Bromcresol Purple Lactose Agar (BD Bromcresol-Violett-Lactose-Agar) ist ein nicht selektives Differenzierungsmedium zur quantitativen Bestimmung von Bakterien im Urin. Es unterstützt das Wachstum von im Urin vorhandenen Krankheitserregern und Kontaminanten, verhindert jedoch ein übermäßiges Schwärmen von Proteus-Spezies aufgrund seines Mangels an Elektrolyten. Das Medium ermöglicht die Differenzierung der isolierten Bakterien in Lactosefermenter und Nicht-Lactosefermenter. GRUNDLAGEN UND ERLÄUTERUNG DES VERFAHRENS Mikrobiologische Methode. Bromkresolviolett-Lactose-Agar ist eine Modifikation des von Wurtz konzipierten Mediums.1,2 Rindfleischextrakt wurde hinzugefügt, um die Produktivität zu erhöhen. Das Medium ist eine Alternative zu CLED-Agar, enthält jedoch einen anderen pH-Indikator. Wie auch in CLED-Agar, verringert das Fehlen von Elektrolyten das Schwärmen von Proteus-Spezies, wodurch das Medium zur quantitativen Bestimmung von Bakterien im Urin geeignet ist. In BD Bromcresol Purple Lactose Agar liefern Pepton und Rindfleischextrakt die Nährstoffe. Da dieses Medium Lactose als einzige Zuckerart und Bromkresolviolett als pH-Indikator erhält, ermöglicht es die Differenzierung von Lactosefermentern, welche aus diesem Zucker Säuren produzieren und das die Kolonien umgebende Medium gelb verfärben, von NichtLactosefermentern (blau-violett).1 Durch das Fehlen von Natrium wird das Schwärmen der meisten Proteus-Stämme verringert oder unterdrückt. REAGENZIEN BD Bromcresol Purple Lactose Agar Zusammensetzung* pro 1 L destilliertem Wasser Pepton 5,0 g Rindfleischextrakt 3,0 Lactose 10,0 Bromkresolviolett 0,025 Agar 15,0 pH 7.0 +/- 0,3 *Nach Bedarf abgestimmt und/oder ergänzt auf die geforderten Testkriterien. VORSICHTSMASSNAHMEN . Nur für den professionellen Gebrauch. Platten bei Anzeichen von mikrobieller Kontamination, Verfärbung, Austrocknung, Rissen oder sonstigen Anzeichen von Produktverfall nicht verwenden. Hinweise zu Verfahren unter Einhaltung aseptischer Arbeitsweise, Biogefährdung und Entsorgung des gebrauchten Produkts sind der ALLGEMEINEN GEBRAUCHSANLEITUNG zu entnehmen. AUFBEWAHRUNG UND HALTBARKEIT Nach Erhalt Platten bis unmittelbar vor dem Gebrauch im Dunkeln bei 2 – 8 °C in der Originalverpackung lagern. Einfrieren und Überhitzen vermeiden. Die Platten können bis zum Verfallsdatum (s. Kennzeichnung auf der Verpackung) inokuliert und entsprechend den empfohlenen Inkubationszeiten inkubiert werden. Platten aus bereits geöffneten Stapeln mit jeweils 10 Platten können bei Lagerung in einem sauberen Bereich bei 2 – 8 °C bis zu einer Woche verwendet werden. PA-256501.06 -1- QUALITÄTSSICHERUNG DURCH DEN ANWENDER Repräsentative Proben mit den nachfolgend aufgeführten Stämmen inokulieren (detaillierte Informationen siehe ALLGEMEINE GEBRAUCHSANLEITUNG). Platten 18 – 24 h bei 35 – 37 °C aerob inkubieren. Stämme Escherichia coli ATCC 25922 Enterobacter cloacae ATCC 13047 Proteus vulgaris ATCC 8427 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus saprophyticus ATCC 15305 Nicht inokuliert Wachstum Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße, gelbe Kolonien, gelbes Medium um die Kolonien Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße, hellgelbe Kolonien, gelbes bis bläuliches Medium um die Kolonien Farblose bis blau-graue Kolonien, teilweise bis vollständig gehemmtes Schwärmen; blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; kleine blass violette bis gelbe Kolonien; gelbes Medium um die Kolonien Mäßiges bis ausgezeichnetes Wachstum; kleine weiße Kolonien; gelbes Medium um die Kolonien Blau-violett VERFAHREN Mitgeliefertes Arbeitsmaterial BD Bromcresol Purple Lactose Agar (90 mm Stacker-Platten). Mikrobiologisch kontrolliert. Nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial Zusätzliche Kulturmedien, Reagenzien und Laborgeräte nach Bedarf. Probenarten Dieses Medium wird hauptsächlich zur quantitativen Bestimmung und Differenzierung von Bakterien im Urin verwendet. Als Probe eignet sich Mittelstrahl- oder Katheterurin, oder Urin der mittels einer suprapubischen Blasenpunktion gewonnen wurde (siehe auch LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN). Bei der Gewinnung von Urinproben aseptische Kautelen beachten. Der Urin muss spätestens 2 Stunden nach der Probenentnahme direkt auf dem Medium ausgestrichen oder gekühlt aufbewahrt (nicht länger als 24 Stunden) werden, um ein Überwachsen der infektiösen Erreger oder Kontaminanten vor der Inokulation des Mediums zu verhindern.3,4 Das Medium kann ebenfalls zur Differenzierung von Isolaten anderer Proben in Lactosefermenter und Nicht-Lactosefermenter verwendet werden. Testverfahren Eine Probe des unverdünnten, gut durchmischten Urins unter Verwendung einer kalibrierten Impföse (0,01 oder 0,001 mL) entnehmen. Auf die korrekte Füllung der Impföse mit der Probe achten. Die Probe in der Mitte der Platte in einem einzigen Ausstrich inokluieren, von dem aus das Inokulat weiter verteilt wird.4,5 Platten 24 – 48 h in Umgebungsluft bei 35 ± 2 °C inkubieren. Zur Differenzierung von Isolaten von anderen Proben in Lactosefermenter und NichtLactosefermener die Isolate (welche als Reinkultur vorhanden sein müssen) auf dem Medium ausstreichen, um isolierte Kolonien zu erhalten, und Platten wie für Urinproben beschrieben inkubieren. Ergebnisse Platten nach der Inkubation auf Wachstum und die entsprechenden Farbreaktionen überprüfen. Kolonien von Lactose-fermentierenden Organismen sind gelb, umgeben von einem gelben Hof im Medium. Kolonien von Nicht-Lactosefermentern sind farblos bis grau-blau and führen nicht zur einer Farbveränderung des Mediums. PA-256501.06 -2- Berechnung und Interpretation der Ergebnisse Die Anzahl der Kolonien (KBE) auf der Platte bestimmen. Bei Verwendung einer 0,01-mLImpföse entspricht jede daraus resultierende Kolonie 100 KBE/mL Urin; Bei Verwendung einer 0,001-mL-Impföse entspricht jede Kolonie 1000 KBE/mL Urin.3 Mittelstrahl- und Katheterurin: Nach aktuellen Richtlinien deutet eine Dichte von 105 KBE/mL eines Isolats auf eine Infektion hin, eine Dichte von <105 KBE/mL deutet auf eine Kontamination der Harnröhre oder der Vagina hin und ein Wert zwischen 104 – 105 KBE/mL erfordert eine erneute Bewertung anhand der klinischen Informationen.3,4 Kontaminante Bakterien treten meist in geringer Zahl und mit unterschiedlicher Koloniemorphologie auf. Urin, der durch suprapubische Blasenpunktur gewonnen wurde: Da die Harnblase bei infektionsfreien Patienten steril ist, deutet jede nachgewiesene KBE auf eine Infektion hin. Krankheitserreger im Urin erbringen im Allgemeinen hohe Koloniezahlen mit einheitlicher Koloniemorphologie und müssen zur Identifizierung und Empfindlichkeitsprüfung direkt auf einem Routinemedium subkultiviert werden.4,5 LEISTUNGSMERKMALE UND VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN BD Bromcresol Purple Lactose Agar eignet sich zur Isolierung und quantitativen Bestimmung einer Vielzahl von aerob wachsenden Mikroorganismen, z.B. Enterobacteriaceae, Pseudomonas und weitere nicht-fermentierende gramnegative Stäbchen, Enterokokken, Staphylokokken, Candida-Spezies, und viele andere Spezies aus Urinproben. Streptokokken und andere Organismen, die Blut oder Serum zum Wachstum benötigen, können möglicherweise nur unzureichend auf diesem Medium gewonnen werden oder erfordern unter Umständen eine verlängerte Inkubationszeit. Daher sollte die Probe bei Verdacht auf solche Organismen gleichzeitig auf einer Blutagarplatte kultiviert werden. Erreger urogenitaler Infektionen wie Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia, Ureaplasma oder andere anspruchsvolle Organismen weisen auf diesem Medium kein Wachstum auf. Informationen über geeignete Nachweismethoden dieser Organismen sind der Literatur zu entnehmen.3-5 Obwohl eine Differenzierung anhand der Lactose-Fermentierung und bestimmte andere diagnostische Tests direkt auf diesem Medium durchgeführt werden können, sind für eine vollständige Identifizierung biochemische und, falls indiziert, immunologische Tests unter Verwendung von Reinkulturen erforderlich. Leistungsergebnisse In einer internen Untersuchung wurde das Medium mit zwanzig Stämmen getestet, wovon 17 Enerobacteriaceae und drei grampositive Kokken waren. Alle Stämme zeigten ausgezeichnetes Wachstum und ermöglichten die Differenzierung in Lactosefermenter und NichtLactosefermenter. Das Schwärmen von Proteus wurde signifikant verringert bis vollständig gehemmt und ermöglichte die quantitative Bestimmung von Kolonien und Subkulturen von gemischten Kulturen. Einzelheiten sind in der folgenden Tabelle dargestellt: Spezies Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Escherichia coli, Lactose-positiv Escherichia coli, Lactose-negativ Morganella morganii Proteus mirabilis Proteus penneri Proteus vulgaris PA-256501.06 Wachstum auf BD Bromcresol Purple Lactose Agar Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; kleine, gelbliche bis weiße Kolonien; gelbes Medium um die Kolonien Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße bis große, gelbe Kolonien, gelbes Medium um die Kolonien Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße bis große, graue Kolonien, blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße graue Kolonien; blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße bis große, graue Kolonien; kein Schwärmen; blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße bis große, graue Kolonien; Zonen leichten Schwärmens um die Kolonien; blau-violettes Medium -3- Providencia alcalifaciens Providencia stuartii Salmonella Abony Salmonella Enteritidis Salmonella Saintpaul Salmonella Typhimurium Shigella boydii Shigella flexneri (2 Stämme) Shigella sonnei (2 Stämme) Staphylococcus aureus Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße graue Kolonien; blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße grau-weiße Kolonien; blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße bis große, grau-weiße Kolonien, blau-violettes Medium Gutes bis ausgezeichnetes Wachstum; mittelgroße graue Kolonien; blau-violettes Medium LITERATUR 1. Wurtz. 1897. Techniques bactériologiques. Masson, Paris. 2. Atlas, R.M.: Handbook of Microbiological Media (L.C. Parks, editor).1993. CRC Press, Boca Raton, USA. 3. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. VERPACKUNG/LIEFERBARE PRODUKTE BD Bromcresol Purple Lactose Agar Best.-Nr. 256501 Gebrauchsfertige Plattenmedien, 20 Platten WEITERE INFORMATIONEN Weitere Informationen erhalten Sie bei Ihrer örtlichen BD-Vertretung. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 [email protected] http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/ ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2012 BD PA-256501.06 -4-
