PrioCHECK PPV Ab 7588981 2 plates v1.2_d

PrioCHECK® PPV Ab
ELISA für den in vitro Nachweis von Antikörpern gegen das Porzine Parvovirus in Serum von Schweinen
Packung für 176 Proben
©
Prionics AG
Gebrauchsinformation
Die deutsche Gebrauchsinformation ist
nach § 17c TierSG zugelassen
Version 1.2_d
Einführung
Das Porzine Parvovirus (PPV) ist ein kleiner Virus mit
einsträngiger DNA aus der Familie der Parvoviridae.
Der Virus ist ein überall vorkommender Infektionserreger in Schweinen, der die Fortpflanzung in Schweineherden negativ beeinträchtigt und Züchter weltweit
wirtschaftlich betrifft. Das Virus kann die Plazenta
passieren. Die Folgen einer Infektion mit PPV hängen
vom Immunstatus des Muttertiers im Trächtigkeitsstadium bei Auftreten der Infektion ab. Bei nicht-immunen
Muttertieren können PPV-Infektionen, die vor dem 35.
Tag der Trächtigkeit eintreten, zum Tod des Embryos
führen. Nach etwa 70 Tagen, wenn die Föten immunkompetent sind, kann der Schweinefötus durch die
Produktion von Antikörper gegen PPV eine Immunreaktion starten und die Infektion überleben. Dies führt
im Allgemeinen zur Geburt gesunder, serologisch
positiver Ferkel.
Der PrioCHECK® PPV Ab weist bereits sieben Tage
nach der primären Infektion spezifische Antikörper
nach. Der Antikörpertiter erreicht ungefähr 10 Tagen
nach der Infektion ein Plateau.
Durch Titration paarweiser Serumproben, die aus
einer Herde in einem Zeitabstand von mehreren
Wochen entnommen wurden, kann der Infektionsstatus überwacht werden. Basierend auf dieser Information können Entscheidungen über die Kontrolle der
Infektion durch Impfung getroffen werden.
Testprinzip
Der PrioCHECK® PPV Ab ELISA ist ein Test mit
Einzelverdünnung. Serumproben werden in einer 1:5
Verdünnung gemessen. Die Testseren werden mit
PPV-Antigen gemischt, während der folgenden Inkubation bilden spezifische Antikörper, falls vorhanden,
einen Immunkomplex mit dem Antigen. Nach dieser
Vorinkubation wird die Mischung in eine mit Antikörpern beschichtete Testplatte überführt. Während der
anschliessenden Inkubation in der Testplatte, wird
vorhandenes freies PPV-Antigen an die mit Antikörper
beschichteten Wells gebunden, wohingegen Antigen,
das vorher einen Immunkomplex mit Antikörpern des
Testserums gebildet hat (= blockiertes Antigen) nicht
gebunden wird. Nach dem Wegspülen der ungebundenen Reagenzien gibt man Konjugat zu, welches mit
dem gebundenen Antigen reagiert. Nach einer weiteren Inkubation werden die Wells nochmals gewaschen
und Chromogen (TMB) Substrat wird zugegeben.
Die Farbentwicklung wird nach 15 Minuten gestoppt
und bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen.
Komponenten des Testkits
Das Kit soll bis zum Verfallsdatum bei 5±3°C auf
bewahrt werden. Siehe Kit-Etikett für jeweiliges Verfallsdatum. Die Haltbarkeit verdünnter, geöffneter oder
rekonstituierter Komponenten ist nachstehend gegebenenfalls vermerkt.
Chemische Gefahrstoffdaten liegen in Abschnitt
„Sicherheitsvorschriften und R&S Angaben“ (Anhang
II) vor.
Komponente 1
Testplatte
Zwei Streifen-Testplatten.
Komponente 2
Konjugat (30x)
(30x konzentriert, vor dem Gebrauch verdünnen)
Ein Fläschchen enthält 1,5 ml Konjugat.
Erst kurz vor Gebrauch verdünnen, die Konjugatverdünnung nicht stabil.
Komponente 3
Verdünnungspuffer (5x)
(5x konzentriert, vor dem Gebrauch verdünnen)
Ein Fläschchen enthält 60 ml Verdünnungspuffer.
Haltbarkeit der Verdünnungspuffergebrauchslösung: 5
Stunden bei 22±3°C.
Komponente 4
Waschpuffer (200x)
(200x konzentriert, vor dem Gebrauch verdünnen).
Ein Fläschchen enthält 60 ml Waschpuffer.
Haltbarkeit der Waschlösung: eine Woche bei 22±3°C.
Komponente 5
Demineralisiertes Wasser
Ein Fläschchen enthält 10 ml Demineralisiertes Wasser.
Komponente 6
Pferdeserum (lyophilisiert)
Ein Fläschchen enthält 3,5 ml lyophilisiertes Pferdeserum.
Haltbarkeit des rekonstituierten Pferdeserums: bis zum
Verfallsdatum bei -20°C.
Komponente 7
Antigen (lyophilisiert)
Zwei Fläschchen mit je 6,0 ml lyophilisiertem Antigen.
Haltbarkeit des rekonstituierten Antigens: in Portionen
bis zum Verfallsdatum bei -20°C.
Komponente 8
Referenzserum 1 (gebrauchsfertig)
Ein Fläschchen enthält 1,0 ml Referenzserum 1
(Positivkontrolle)
Komponente 9
Referenzserum 2 (gebrauchsfertig)
Ein Fläschchen enthält 1,0 ml Referenzserum 2
(Negativkontrolle)
Komponente 10
Chromogen (TMB) Substrat (gebrauchsfertig)
Ein Fläschchen enthält 60 ml Chromogen (TMB)
Substrat.
Komponente 11
Stopplösung (gebrauchsfertig)
Ein Fläschchen enthält 60 ml Stopplösung.
Weitere Kitbestandteile:
- Gebrauchsinformation
- 1 Deckel um die Streifen während der Inkubation
abzudecken
- Analysenzertifikat
Nur für in-vitro Veterinärdiagnostik
Bei 5±3°C lagern
Produkt-Nr.: 7588981
Für Deutschland: Zulassungsnummer FLI-B
Ablauf des Tests
Vorsichtsmassnahmen
Beim Arbeiten mit Tierproben müssen Nationale
®
Richtlinien streng befolgt werden. Der PrioCHECK
PPV Ab muss in für diesen Zweck geeigneten Laboratorien durchgeführt werden.
Proben müssen als potentiell infektiös betrachtet
werden und alle mit den Proben in Berührung kommenden Gegenstände als potentiell kontaminiert
erachtet werden.
Chemische Gefahrstoffdaten liegen in Abschnitt
„Sicherheitsvorschriften und R&S Angaben“ (Anhang
II) vor.
Hinweise
Um optimale Ergebnisse mit dem PrioCHECK® PPV
Ab zu erhalten, müssen folgende Hinweise beachtet
werden:
Das Testverfahren muss streng eingehalten
werden.
Alle Reagenzien des Kits müssen vor Gebrauch auf
Raumtemperatur (22±3°C) gebracht werden.
Pipettenspitzen müssen nach jedem Pipettierschritt
gewechselt werden.
Für jedes Reagenz müssen eigene Behälter verwendet werden.
Kitbestandteile dürfen nach ihrem Verfallsdatum,
oder wenn Änderungen in ihrem Aussehen festgestellt werden, nicht mehr verwendet werden.
Kitbestandteile verschiedener Kit-Chargennummern
dürfen nicht zusammen verwendet werden.
Demineralisiertes Wasser oder Gleichwertiges für
den Test verwenden.
VORBEREITUNG DER LÖSUNGEN
Verdünnungspuffergebrauchslösung
Den konzentrierten Verdünnungspuffer (5x) (Komponente 3) in demineralisiertem Wasser 1/5 verdünnen.
Stabilität der Verdünnungspuffergebrauchslösung:
5 Stunden bei 22±3°C.
Antigen
Rekonstituieren1 des Antigens (Komponente 7) mit 6
ml Verdünnungspuffergebrauchslösung. Wird nur ein
Teil des Testkits verwendet, muss das Fläschchen mit
rekosntituiertem Antigen in Portionen von je 1,0 ml
eingeteilt werden (für maximal 6 Testläufe pro Platte).
Häufiges Einfrieren und Auftauen vermeiden und das
portionierte Antigen in kleinen Fläschchen bei -20°C
lagern.
Allgemein:
Laborausrüstung gemäss den nationalen Sicherheitsvorschriften.
Pferdeserum
1
Rekonstituieren des lyophilisierten Pferdeserums
(Komponente 6) in 3.5 ml Demineralisiertem Wasser
(Komponente 5).
Das rekonstituierte Pferdeserum kann bis zum Verfallsdatum bei -20°C aufbewahrt werden.
Blindplatten:
Blindplatten für die Verdünnung der Testseren und
zum vorinkubieren mit dem Antigen, z.Bsp.: UBodenplatten (Greiner, Art.-Nr. 650101). Es können
auch andere Platten oder Röhrchen mit geringer
unspezifischer Proteinadsorption verwendet werden.
Konjugatpuffer
Um den Test mit zwei Streifen durchzuführen 1,9 ml
Verdünnungspuffergebrauchslösung zu 0,1 ml rekonstituiertem Pferdeserum (Endkonzentration des
Pferdeserums beträgt 5% (v/v)) zugeben.
Stabilität des Konjugatpuffers: 24 Stunden bei 5±3°C.
Zusätzlich benötigte Materialien und
Geräte
Inkubation:
Microtiterplatten-Inkubator mit Temperaturregelung
(mindestens 50°C)
Analysenergebnisse:
Plattenleser, z.B Multiscan EX oder Gleichwertigen.
Der Leser muss einen geeigneten Filtersatz haben um
die Platten bei 450 nm ablesen zu können.
Optional:
Waschgerät, z.B. Tecan EIA Plattform oder
Gleichwertiges.
1
-
-
Rekonstitution der lyophilisierten Reagenzien muss wie folgt durchgeführt
werden:
Die Fläschchen auf 22±3°C bringen.
Fläschchen aufrecht halten und leicht gegen die Arbeitsfläche
schlagen um sicherzustellen, dass sich der Inhalt auf dem Boden des
Fläschchens befindet.
Fläschchen öffnen.
Angegebene Menge an Demineralisiertem Wasser zufügen.
Warten bis sich lyophilisiertes Material aufgelöst hat.
Stöpsel wieder auf das Fläschchen setzen und das Fläschchen
vorsichtig schwenken, damit sich restliches trockenes Material auflöst.
Lyophilisiertes Material 15 Minuten bei 22±3°C st ehen lassen.
Gelegentlich Fläschchen behutsam umdrehen (Schaumbildung muss
vermieden werden).
PrioCHECK® PPV Ab
Konjugatvedünnung
Verdünnen des Konjugats (30x) (Komponente 2) 1/30
in Konjugatpuffer. Um den Test mit zwei Streifen
durchzuführen 1,8 ml zubereiten.
Hinweis: Die Konjugatverdünnung ist nicht stabil,
erst kurz vor Verwendung anfertigen.
Hinweis: Es können kommerzielle ELISA-Waschgeräte
verwendet werden. Falls diese nicht zur Verfügung stehen
können die Platten manuell durch pipettieren von 200 µl bis 300
µl Waschlösung in jedes Well der Platte gewaschen werden.
Danach die Platte ausleeren und den Vorgang so oft wie
vorgeschrieben wiederholen. Es besteht keine Notwendigkeit
die Platte einzuweichen. Die Platten nach dem letzten Waschen
fest ausklopfen.
VORINKUBATION DER PROBEN
UND ANTIGEN
1.1
1.2
1.3
1.4
96 µl Verdünnungspuffergebrauchslösung mit
24 µl Referenzserum 1 (Komponente 8) und
120 µl rekonstituiertem Antigen mischen.
96 µl Verdünnungspuffer mit 24 µl Referenzserum 2 (Komponente 9) und 120 µl rekonstituiertem Antigen mischen.
12 µl jeder Serumprobe mit 48 µl Verdünnungspuffergebrauchslösung und 60 µl rekonstituiertem Antigen mischen.
Während 60±5 Minuten bei 37±1°C inkubieren.
INKUBATION IN DER TESTPLATTE
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
2.7
2.8
Jeden Streifen der Testplatte (Komponente 1)
mit einem Markierstift beschriften.
100 µl der Verdünnungspuffergebrauchslösung
in die Wells A1 und B1 pipettieren.
50 µl der Verdünnungspuffergebrauchslösung
in die Wells C1 und D1 pipettieren.
50 µl des rekonstituierten Antigens in die Wells
C1 und D1 pipettieren und mischen.
100 µl des Referenzserum 1/Antigen Gemisches in die Wells E1 und F1 pipettieren.
100 µl des Referenzserum 2/Antigen Gemisches in die Wells G1 und H1 pipettieren.
100 µl des Probe/Antigen Gemisches in die
verbleibenden Wells pipettieren.
Die Testplatte abdecken und während 120±5
Minuten bei 37±1°C inkubieren.
INKUBATION MIT KONJUGAT
3.1
3.2
3.3
Die Platte entleeren und 6-mal mit 200 µl bis
300 µl Waschlösung waschen. Die Platte nach
dem letzten Waschzyklus fest ausklopfen.
100 µl der Konjuagtverdünnung in jedes Well
pipettieren.
Die Testplatte abdecken und während 60±5
Minuten bei 37±1°C inkubieren.
INKUBATION MIT CHROMOGEN (TMB) SUBSTRAT
4.1. Die Testplatte nach der Inkubationszeit entleeren und 6-mal mit 200 µl bis 300 µl Waschlösung
waschen. Die Testplatte nach dem letzten
Waschzyklus fest ausklopfen.
4.2 100 µl Chromogen (TMB) Substrat in jedes Well
pipettieren.
4.3 Die Testplatte 15 Minuten bei 22±3°C inkubieren.
4.4 100 µl der Stopplösung (Komponente 11) in
jedes Well zugeben.
4.5 Inhalte der einzelnen Wells vor dem Messen
mischen.
Hinweis: Mit der Zugabe der Stopplösung 15 Minuten nach
dem Befüllen des ersten Wells mit Chromogen (TMB) Substrat
beginnen. Die Stopplösung in derselben Reihenfolge und
Geschwindigkeit zugeben wie das Chromogen (TMB) Substrat.
ABLESEN DES TESTS UND BERECHNUNG DER
ERGEBNISSE
5.1
5.2
5.3
5.4
Die optische Dichte (OD) der Wells bei 450 nm
innerhalb von 15 Minuten nach Stoppen der
Farbentwicklung messen.
Den mittleren OD450-Wert der Wells A1 und B1
(=OD450 Blindwert) berechnen.
Den korrigierten OD450-Wert der Referenzseren
1 und 2 und der Serumproben durch Subtrahieren des mittleren OD450-Blindwerts berechnen.
Den Mittelwert der korrigierten OD450 der Wells
C1 und D1 (=OD450 max) berechnen.
5.5
Die prozentuale Inhibition (PI) wird gemäss
nachstehender Formel berechnet:
Hinweis: Die korrigierte OD450 aller Proben wird als
prozentuale Inhibition (PI) im Verhältnis zur
korrigierten mittleren OD450 max ausgedrückt.
PI = 100-
korrigierte OD450 Testprobe
--------------------------------------- x 100
korrigierte OD450 max
AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
Validitätskriterien
6.1 Die mittlere OD450 der Blindkontrolle (Wells A1
und B1) muss <0,300 sein.
6.2 Die korrigierte OD450 max (Wells C1 und D1)
muss >1,000 sein.
6.3 Die PI von Referenzserum 1 (Positivkontrolle)
muss >50% sein.
6.4 Die PI von Referenzserum 2 (Negativkontrolle)
muss <50% sein.
6.5 Wird eines der Kriterien nicht erfüllt so ist die
Platte ungültig.
Hinweis: Wenn die korrigierte OD450 max unter 1,000 liegt, ist
das Chromogen (TMB) Substrat vermutlich zu kalt. In diesem
Fall die Lösung vorher auf 22±3°C erwärmen oder bis zu 30
Minuten inkubieren.
Wenn die korrigierte mittlere OD450 max über 2,000 liegt wird
eine kürzere Inkubationszeit mit dem Chromogen (TMB)
Substrat empfohlen.
Auswertung der prozentualen Inhibition
PI = ≥50%
Probe ist positiv auf PPV-spezifische Antikörper.
PP = <50%
Probe ist negativ auf PPV-spezifische Antikörper.
Anhang I
Hinweis
Diese Packungsbeilage gilt als vollständig und richtig zum
Zeitpunkt ihrer Veröffentlichung. Inhalte der Packungsbeilage bedürfen in Deutschland der Genehmigung durch das
Friedrich-Loeffler Institut (FLI). Prionics AG haftet keinesfalls für Neben- oder Folgeschäden, die sich im Zusammenhang mit oder in der Folge der Benutzung dieses
Handbuches ergeben.
Haftbarkeit
Prionics AG garantiert, dass seine Produkte die entsprechende veröffentlichte Spezifikation erfüllen, wenn sie in
Übereinstimmung mit den entsprechenden Anleitungen
verwendet werden und innerhalb der angegebenen
Produktlebensdauer. Prionics AG gibt keine andere
Garantie, weder ausdrücklich noch stillschweigend. Das
Unternehmen übernimmt keinerlei Garantie hinsichtlich der
Marktgängigkeit und Eignung seiner Waren für einen
besonderen Zweck. Die hier erteilte Garantie und die
Daten, Spezifikationen und Beschreibungen der Produkte
der Prionics AG, die in den von Prionics AG herausgegebenen Katalogen und in Informationen zum Produkt
auftauchen kann nicht verändert werden, außer durch
ausdrückliche schriftliche Zustimmung durch ein Vorstandsmitglied der Prionics AG. Mündliche oder schriftliche
Informationen, die nicht mit dieser Garantie übereinstimmen, oder falls sie weitergegeben werden, sind nicht
genehmigt, und falls sie gegeben werden, sind sie nicht
gültig.
Bei Auftreten eines Defektes, der im Rahmen der vorstehenden Garantiebestimmungen gedeckt ist, besteht für
Prionics AG nur die Verpflichtung, wahlweise das entsprechende Produkt oder Teile hiervon zu reparieren oder zu
ersetzen, wobei es im Ermessen von Prionics AG liegt, ob
das Produkt ersetzt oder repariert wird. Dem Kunden
obliegt es Prionics AG rechtzeitig über das Auftreten eines
solchen Defektes zu informieren. Wenn Prionics AG das
Produkt oder ein Teil davon nicht innerhalb einer angemessenen Frist reparieren oder ersetzen kann, wird
Prionics AG den Kaufpreis für das Produkt oder dessen
Teil zurückerstatten.
Soweit im Rahmen des anwendbaren Rechts zulässig, ist
Prionics AG nicht ersatzpflichtig für direkte, indirekte,
spezifische, beiläufige oder Folgeschäden durch Verlust
oder Beschädigung infolge der Verwendung seiner Produkte.
Prionics AG und Prionics Lelystad BV sind nach ISO
9001:2000 zertifizierte Gesellschaften.
Anhang II
Sicherheitsvorschriften und R&S Sätze
Nationale Sicherheitsvorschriften müssen streng befolgt
werden.
Komponente 1
Testplatte
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 2
Konjugat (30x)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 3
Verdünnungspuffer (5x)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 4
Waschpuffer (200x)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 5
Demineralisiertes Wasser
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 6
Pferdeserum (lyophilisiert)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 7
Antigen (lyophilisiert)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 8
Referenzserum 1 (gebrauchsfertig)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 9
Referenzserum 2 (gebrauchsfertig)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 10
Chromogen (TMB) Substrat (gebrauchsfertig)
Gefahrenklasse: Dieses Produkt ist nicht nach den EU Vorschriften klassifiziert.
Komponente 11
C; Ätzend
Stopplösung (gebrauchsfertig)
Gefahrenklasse: R35: Verursacht schwere Verätzungen.
S26: Bei Berührung mit den Augen gründlich mit Wasser
abspülen und Arzt konsultieren.
S36/37/39: Bei der Arbeit geeignete Schutzkleidung, Schutzhandschuhe und Schutzbrille/Gesichtsschutz tragen.
S45: Bei Unfall oder Unwohlsein sofort Arzt hinzuziehen (wenn
möglich, dieses Etikett vorzeigen)
Anhang III
Referenzen
(1) F. Westenbrink, M.A. Veldhuis und J.M.A. Brinkhof
Journal of Virological Methods, 23: (1989) 169, -178.
Kontakt
Prionics AG
Wagistrasse 27a
CH-8952 Schlieren-Zurich
Switzerland
Tel. +41 44 200 2000
Fax +41 44 200 2010
www.prionics.com
[email protected]
Prionics Lelystad B.V.
Platinastraat 33
P.O. Box 2271
NL-8203 AG Lelystad
Niederlande
Tel: +31 320 714000
Fax: +31 320 714029
Antragsteller und Vertreiberfirma
Prionics Deutschland GmbH
Hans-Urmiller-Ring 17a
82515 Wolfratshausen
Deutschland
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Fax +49 (0) 8171 99 747 19
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