Virologische Methoden zur Diagnostik der HSV

Virologische Methoden zur Diagnostik
der HSV-Infektionen
Prof. H.W. Doerr
Institut f. Medizinische Virologie
Klinikum der Johann Wolfgang
Goethe-Universität Frankfurt am Main
www.kgu.de/zhyg
© Australian Herpes Management Forum
Ekzema herpeticum
Prinzipien der Virusdiagnostik
Direkter Virusnachweis
Nachweis der Immunantwort
• Virusisolierung
• humoral: verschiedene
Klassen (IgG, IgA, IgM) und
Unterklassen von Antikörpern
• Elektronenmikroskopie
• Lichtmikroskopie von
Gewebe und Zellkulturen
• Nachweis des viralen
Antigens
• Nachweis der viralen
Nukleinsäure
• zellulär: cytotoxische T-Zellen
• unspezifisch:
Interferone, durch
Interferone induzierte Enzyme
Transmission electron micrograph of herpes simplex virus
Some nucleocapsids are empty, as shown by penetration of electron-dense stain.
CDC/Dr. Erskine Palmer
HSV 1
Durchmesser 100-200 nm
Genom: ds DNA
Herpes simplex - Zellkultur
Zellkultur auf Affennierenzellen;
links uninfizierte Zellen, rechts mit HSV infizierte Zellen
In vitro Inhibition der Herpes simplex-Virus-Vermehrung auf MonolayerZellkulturen. Aktivitätsvergleich von Aciclovir mit anderen antiviral
wirksamen Substanzen (Plaques-Reduktions-Methode)
Kontrolle
Idoxuridin
Vidarabin
Aciclovir
Aciclovir
50 µg
50 µg
0,5 µg
1,25 µg
Molekularbiologische Methoden zum Nachweis
und zur Charakterisierung von Viren
• Elektrophorese, RFLP etc.
• Hybridisierung
• PCR
• andere NA-Amplifikationstechniken (bDNA,
NASBA, LCR, TMA etc.)
• Sequenzierung
Foto einfügen:
Differenzierung Herpes I
und II
HSV Typ I
Referenz
HSV-Isolate 1, 2, 3
HSV Typ II
Referenz
HSV-Isolate 21 & 22
Fig: Differenzierung zwischen HSV Typ I und Typ II mittels Restriktionsenzym-Analyse
mit Hind III
PCRPrinzip
Foto PCR
RFLP-Analyse klinischer HSV-1 Stämme
Foto: RFLP-Analyse
Rsa I Verdau von HSV-1 TK Produkten
Herpes simplex encephalitis: CSF PCR
Ethidium bromide gel electrophoresis of PCR
products
HSV Typing and Strain Differentiation
using PCR and Subsequent RFLP
UL
UL 23
Thymidine kinase
U
UL 30
DNA polymerase
UP
HSV-1 Tk-1
S
DOWN
HSV-1 and HSV-2
Tk-2
477 bp
500 bp
DNAP5
HSV-1
Tk-3
274 bp
Tk-4
DNAP3-1
HSV-1
469 bp
DNAP5
DNAP3-2
391 bp
HSV-2
HSV Gingivostomatitis
© Australian Herpes Management Forum
In situ hybridization of human trigeminal ganglia
A
B
Herpes Simplex Virus
Varicella-Zoster Virus
Auftreten von HSV-1 und HSV-2 beim Menschen
D iagnostic of Herpes genitalis
clinical
diagnosis
laboratory diagnosis
direct detection
(swabs)
(swabs)
isolation of
virus in
cell culture
antigen detection
(CFT, ELISA, IFT)
(electron microscopy)
(DNA-detection: PCR)
indirect detection
(immune response)
antibody detection
IgG, IgM, IgA
(ELISA, IFT, western blot)