Protokollblatt „Mikroskopie“
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Kurs 1 Themen: Färbungen Köhlern 3 – Ösen – Ausstrich Rachenabstrich Fingerabdruck Aufgaben: 1. Einstellen des mikroskopischen Strahlenganges nach „Köhler“ 2. 2 Präparate „Bakteriengemisch“ anfertigen und färben Präparat 1: Methylenblaufärbung Präparat 2: Gramfärbung 3. Die selbstangefertigten Präparate mikroskopieren und mit dem ausgelegten Präparat „Ery+Leuko“ und „Bakteriengemisch“ vergleichen 4. Beschreiben Sie im Protokollblatt „Mikroskopie“ - die Farbe (grampositiv, gramnegativ) die Form (rund, oval, lanzettförmig,stäbchenförmig) die Lage der Bakterien zueinander(einzeln,paarweise,kettenförmig,traubenförmig) sonstige Gebilde(Zellkern, Epithelien,Leukozyten,Zelldetritus) die Lage der Bakterien zu Leukozyten (intra- oder extrazellulär) Grössenverhältnisse Bakterien – Zellen 5. 3 – Ösen-Ausstrich anfertigen 6. Rachenabstrich anfertigen - Präparat: Gramfärbung - Ausstrich auf Blutagarplatte; Beschriftung nicht vergessen! 7. Hygienische Händedesinfektion „Fingerabdruck“ Arbeitsanleitungen zu Kurs 1 Einstellen des mikroskopischen Strahlenganges nach „Köhler“ 1. 2. 3. 4. Gefärbtes Präparat scharf einstellen Leuchtfeldblende am Mikroskopfuss bis zum Anschlag schliessen Kondensor vorsichtig in der Höhe verstellen, bis Rand des 6-Ecks scharf erscheint. Kondensor zentrieren, bis die sechseckige Abbildung der Leuchtfeldblende im Zentrum steht. Falls 6-Eck trotz Kondensorverstellung nicht gesehen wird, auf 10-Objektiv umstellen ( Cave:Ölkontakt!) und Punkte 1.-4. ausführen, dann auf 100er-Objektiv plus Ölimmersion zurückstellen und Punkte 1. –4. wiederholen. 5. Leuchtfeldblende leicht öffnen, bis Gesichtsfeld gerade ausgeleuchtet. (Die Aperturblende am Kondensor bleibt stets geöffnet) Herstellung des Ausstrichpräparates 1. Mit dem Glasschreiber Präparate markieren. 2. Auf einen sauberen Objektträger mit der ausgeglühten und abgekühlten Öse eine Öse Bakteriengemisch bringen. 3. Präparat an der Luft trocknen. 4. Das völlig luftgetrocknete Präparat hitzefixieren: Objektträger - Schichtseite nach oben - dreimal durch die Flamme des Bunsenbrenners ziehen. Färbung mit L ö f f l e r s alkalischer Methylenblaulösung (Einfachfärbung) 1. 2. Hitzefixierten Ausstrich mit Methylenblaulösung bedecken und 2 min einwirken lassen. Farbe abgießen, vorsichtig mit schwachem Wasserstrahl abspülen und sofort danach zwischen Filterpapier trocknen. Die Bakterien erscheinen kräftig blau, etwa vorhandene Körperzellen hellblau gefärbt. Die Färbung eignet sich besonders für Präparate, in denen Bakterien und Körperzellen sowie ihre Lagerung zueinander sichtbar werden sollen. Hauptanwendung ist die Darstellung der Form und Lagerung von Bakterien (z. B. Gonokokken). Färbung nach G r a m (Differentialfärbung) Prinzip: Karbol-Gentianaviolett bilden mit Lugol-Lösung (verdünnte Jod-Kaliumjodid-Lösung) in der Zellwand einen Farbstoff-Jod-Komplex. Durch Differenzieren mit Alkohol oder Aceton wird dieser Komplex nur aus gramnegativen Bakterien wieder entfernt. Die Gegenfärbung kann dann mit Fuchsin erfolgen. Durchführung: 1. Hitzefixierten Ausstrich vollständig mit Karbol – Gentianaviolett bedecken. Nach 2 min Farbe abgießen. 2. Lugol-Lösung 2 min einwirken lassen. Kurz mit Wasser abspülen. 3. Entfärben mit Aceton-Alkohol (in Küvette), bis keine Farbwolken mehr abgehen. 4. Gründlich mit Wasser abspülen. 5. Gegenfärbung mit verdünnter Fuchsinlösung 1 - 2 min. 6. Objektträger mit Wasser abspülen und anschließend zwischen Filterpapier trocknen. Beurteilung: Grampositive Bakterien sind blauschwarz gefärbt. Gramnegative Bakterien sind rot gefärbt. Gefärbte Präparate werden o h n e Deckglas mit Öl mikroskopiert. Sie benötigen v o l l e s Licht. 3 – Ösen-Ausstrich: Das Ziel ist die Gewinnung gut isolierter Einzelkolonien. - Mit Impfmaterial behaftete Öse in Zickzacklinien über etwa die Hälfte der Nähbodenoberfläche führen, ohne sie aufzukratzen. - Öse ausglühen lassen, dann zwei- bis dreimal durch den ersten Ausstrich gehen und ein weiteres Viertel der Oberfläche beimpfen. - Mit der erneut ausgeglühten Öse das letzte Viertel beimpfen mit Material, das analog vom vorhergehenden Viertel gewonnen wurde. Protokollblatt „Mikroskopie“ Präparat A B C D E Bakteriengemisch Bakteriengemisch Ery + Leuko. Fertiges Rachenabstrich Bakteriengemisch Methylenblau nach Färbung Gram Löffler 1) färberisches Verhalten 2) Form der Bakterienzellen 3) Lage der Bakterienzellen zueinander 4) sonstige Elemente 5) Lage der Bakterienzellen zu Leukozyten 7) Grössenverhätnisse Bakterien - Zellen Zu Protokollblatt „ Mikroskopie“: 1. 2. 3. 4. 5. färberisches Verhalten: gramnegativ, grampositiv, gramlabil, säurefest, Polkörperchen Form der Bakterienzellen: rund, kurze Stäbchen , lange Stäbchen, gerade, gebogen, Lage der Bakterienzellen zueinander: einzeln, paarig, in Ketten, traubenförmig, parallel sonstige Elemente: Zelldetritus, Schleimsubstanz, Leukozyten, Erythrozyten Lage der Bakterienzellen zu Leukozyten: intra- oder extrazellulär Gram Gram Gram Protokollblatt „ Bakteriengemisch“: Keim 1 Keim 2 Kurs 1: Mikroskop. Bild ( Farbe, Form d. Bakt. ) Kurs 2: Wachstum auf Nähragar Kurs 3: Blutagar Kurs 3: Mac Conkey Kurs3:. Koagulase Kurs 4: Kligler Ergebnis: Kurs 5: Auswertung des Blättchen – Diffusionstest: (s = sensibel; r = resistent ) Penicillin Vancomycin Cefazolin Cefotaxim Hemmhof nach DIN u.a. (mm) Wirkstoff Menge ( µg ) Penicillin Vancomycin Cefazolin Cefotaxim 10 30 30 30 gram neg. Stäbchen S > 24 >12 >24 >30 R <12 <9 <18 <20 Staphylokokken S >29 >12 >24 >30 R <28 <9 <18 <20 Für Ihre Notizen:
