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VERERBUNG
CHROMATOGRAPHIE VON AMINOSÄUREN
Arbeitsanweisungen
0.
Spülen Sie bitte die Chromatographiewanne kurz mit destilliertem Wasser aus.
Anschließend füllen Sie bitte 25 ml des Fließmittels ein und decken das Gefäß zu.
Als Fließmittel dient n-Butanol/Eisessig/Wasser (4:1:1).
1.
Bitte Legen Sie die DC-Platte so vor sich auf den Tisch, daß die schadhaften Ränder links
und rechts liegen.
2.
Ziehen Sie bitte mit einem Bleistift mit Hilfe eines Lineals eine im Abstand von ca. 1 cm
parallel zur Grundkante verlaufende Gerade.
3.
Auf dieser Geraden, die als Startlinie dient, markieren Sie bitte im Abstand von jeweils
ca. 1,5 cm fünf Punkte.
4.
Tragen Sie bitte in diesen Punkten mit Hilfe der Pipette die vier Aminosäuren in der
angegebenen Reihenfolge auf. Bitte halten Sie sich strikt an diese Reihenfolge, es hilft Ihnen
später bei der Identifikation der Substanzflecken. An fünfter Stelle tragen Sie bitte das
Gemisch auf.
Bitte achten Sie streng darauf, daß Sie zum Auftragen der AS bzw. der
Gemische nur die im jeweiligen Reagenzglas befindlichen Pipette
verwenden,
da es sonst zu Verunreinigungen der AS und somit zu Fehlern
kommt!
Achten Sie bitte darauf, daß der jeweilige Substanzfleck nicht größer als 3 bis 5 mm im
Durchmesser wird.
5.
Lassen Sie die aufgetragenen Aminosäuren bzw. Gemische bitte kurz auf der Platte
antrocknen.
6.
Stellen Sie dann bitte jeweils zwei Platten so in den Chromatographietrog, daß die
beschichteten Seiten nach außen zeigen.
7.
Lassen Sie die Platten bitte so lange im Trog, bis sich die Fließmittelfront ca. 2 cm vom
oberen Rand befindet.
8.
Entnehmen Sie die Platten dem Trog, und lassen Sie sie unter dem Abzug trocknen,
nachdem
Sie die Fließmittelfront (oberer Rand) deutlich durch Einritzen in die
Kieselgelschicht
markiert haben.
9.
Anschließend besprühen Sie die Platten bitte unter dem laufenden Abzug mit der
Ninhydrin- Sprühreagens.
Bitte von dieser Reagens nichts einatmen!
Dann lassen Sie die Platten bitte wieder trocknen.
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VERERBUNG
CHROMATOGRAPHIE VON AMINOSÄUREN
Auswertung
1.
Legen Sie auf die getrocknete Platte, auf der jetzt kräftige, meist blau-violette Substanzflecken zu erkennen sind (oder sein sollten), einen Bogen Transparentpapier, und übertragen
Sie mit Hilfe eines Bleistiftes oder Filzschreibers Startlinie, Fließmittelfront und Substanzflecken auf das Papier.
2.
Messen Sie nun bitte die Abstände der einzelnen Substanzfleckenmittelpunkte zur Startlinie.
3.
Berechnen Sie anschließend bitte den jeweiligen RF - Wert, der folgendermaßen definiert ist:
R
F

Entfernung _ Startpunkt _ bis _ Fleckmittelpunkt S

Entfernung _ Startpunkt _ bis _ Fließmittelfront F
4.
Versuchen Sie nun bitte, die in Ihrem Gemisch enthaltenen Aminosäuren mit Hilfe der
reinen Aminosäuren zu identifizieren.
Viel Erfolg bei der Arbeit!
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VERERBUNG
CHROMATOGRAPHIE VON AMINOSÄUREN
Gruppe:
Gruppe
Aminosäuren
AS - Gemisch - Nr.
01
Ala - Ile - Met - Gly
9
02
Gly - Glu - Ala - Met
10
03
Ile - Met - Glu - Ala
11
04
Met - Ala - Ile - Ser
12
05
Val - Met - Ala - Gly
13
06
Glu - Gly - Ala - Ile
1
07
Val - Ile - Met - Ala
2
08
Glu - Gly - Ser - Ile
3
09
Gly - Met - Ala - Val
4
10
Glu - Gly - Ser - Met
5
11
Met - Val - Ser - Ala
6
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