Klonchek und PCR

Kloncheck und Übernachtkulturen
Von den nach der Klonierung angelegten Platten werden einzelne Kolonien zur späteren
Vektorisolierung mit der Impföse auf eine Sammelplatte übertragen und die an der Impföse
verbliebenen Reste in einer PCR getestet.
Für die PCR werden hier M13-Reverse/M13-Forward oder T3/T7-Primer verwendet. Die
Primer binden nicht an die DNA des urspr. klonierten PCR-Produkts, sondern im Bereich des
Vektors. Das amplifizierte Stück beinhaltet neben dem PCR-Produkt also auch einen Teil des
Plasmids.
Mit den positiven Klonen wird eine Übernachtkultur angelegt, bei der die Bakterien der
Sammelplatte mit der Impföse in 2 ml LB-Flüssigmedium mit 2 µl Ampicillin transferiert
werden. Mit dieser Flüssigkultur wird am Folgetag eine Vektorisolierung durchgeführt.