Klonchek und PCR
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Kloncheck und Übernachtkulturen Von den nach der Klonierung angelegten Platten werden einzelne Kolonien zur späteren Vektorisolierung mit der Impföse auf eine Sammelplatte übertragen und die an der Impföse verbliebenen Reste in einer PCR getestet. Für die PCR werden hier M13-Reverse/M13-Forward oder T3/T7-Primer verwendet. Die Primer binden nicht an die DNA des urspr. klonierten PCR-Produkts, sondern im Bereich des Vektors. Das amplifizierte Stück beinhaltet neben dem PCR-Produkt also auch einen Teil des Plasmids. Mit den positiven Klonen wird eine Übernachtkultur angelegt, bei der die Bakterien der Sammelplatte mit der Impföse in 2 ml LB-Flüssigmedium mit 2 µl Ampicillin transferiert werden. Mit dieser Flüssigkultur wird am Folgetag eine Vektorisolierung durchgeführt.
