Serologische Untersuchungen Serologie der

Serologische Untersuchungen
Serologie der
Mykoplasmosen
des Geflügels
Dr. med. vet. C. Wunderwald
Institut für Veterinärbakteriologie Universität Zürich
Bedeutung der Mykoplasmosen
n
n
n
n
n
23 verschiedene MycoplasmaSpezies beim Vogel/Geflügel isoliert
Mycoplasma gallisepticum (MG)
- CRD (chronic respiratory disease)
Mycoplasma synoviae (MS)
- infektiöse Synovitis & Infektion des
oberen Respirationstraktes
Mycoplasma meleagridis (MM)
- Aerosacculitis (Truten)
Mycoplasma iowae (MI)
- Mortalität bei Embryonen (Truten)
Bedeutung & Bekämpfung der
Mykoplasmosen
n
geringe Tenazität in der Umwelt
und gegenüber Desinfektionsmittel
n
horizontale und vertikale Übertragung
n
Eradikation
u
u
serologische Kontrolle, Biosekurität
Ausmerzung infizierter Zuchttiere
n
Medikation (Tylosin, Tiamulin, Enrofloxacin)
n
Impfungen gegen MG
u
u
inaktivierte Vakzine (Stamm 6)
Lebendvakzine (MG 6/85)
Diagnose der Mykoplasmosen
n
kultureller Nachweis oft schwierig
(hohe Nährstoffansprüche des Erregers,
5-10% CO2, Inkubation bis 28 Tagen)
n
molekularbiologische Methoden
(Nachweis von DNA, Artidentifizierung)
n
indirekter Erregernachweis mittels
serologischer Methoden
(einfach, kostengünstig)
u
Serumschnellagglutination
u
Hämagglutinationshemmungstest
u
ELISA (MG/MS, MG und MS)
Serologie der Mykoplasmosen
n
n
kein Testsystem mit 100% Sensitivität und
100% Spezifität
Sensitivität
(Falsch-negative Reaktionen)
u
ungenügende Sensitivität des Tests
u
zu früher Zeitpunkt der Blutentnahme
(Mykoplasmen: bis zu 3 Wochen p.i.)
u
Medikation kurz nach der Infektion hemmt
die Seroconversion
u
keine humorale Immunantwort beim
Auftreten „atypischer“ Stämme
Serologie der Mykoplasmosen
n
Spezifität
(Falsch-positive Reaktionen)
u
ungenügende Spezifität des Tests
(Antigen, Serumverdünnung)
u
Qualität des Serums
(bakterielle Kontamination, Serum eingefroren)
u
Kreuzreaktionen
(hohe MS-Antikörpertiter Æ Reaktionen mit MGAntigen)
u
Seren älterer Tiere
u
Vakzine-Effekt (inaktivierte Vakzine, z.B. IB )
u
unspezifsche Bindung an Mikrotiterplatten
Serologische Methoden
SSA
HAH
ELISA
einfach & schnell & billig
arbeits- und zeitaufwendig einfach & schnell
keine technischen
Anforderungen
keine technischen
Anforderungen
ELISA-Technologie
agglutinierende AK ab
1 Woche p.i.
hämagglutinierende AK
ab 3. Woche p.i.
detektierbare AK ab
2.-3. Woche p.i.
Spezifität Ø
Spezifität > SSA
Spezifität > SSA, HAH
Grenzwertbestimmung!
Sensitivität Ø
falsch-negative
Reaktionen möglich
Sensitivität < SSA
stammspezifisch
Sensitivität > HAH, SSA
Herdenmonitoring,
nicht geeignet zur
Einzeltierdiagnostik
Abklärung SSA-positiver
Reaktionen
Herdenmonitoring,
nicht geeignet zur
Einzeltierdiagnostik
SSA = Serumschnellagglutination
HAH = Hämagglutinationshemmung
ELISA
Situation in der Schweiz
Serologischer Nachweis mittels
Serumschnellagglutination 1992-1998
M. gallisepticum
serologisch positive
Betriebe (%)
M. synoviae
serologisch positive
Betriebe (%)
1992 1996
1997 &
1998
1992 1996
1997 &
1998
1076 Betriebe
1.0 - 2.0
1.6 & 1.7
7.0 - 17.0
1.3 & 1.6
Legehennen
10.0 - 14.0
1996: 30.0
18.8 & 14.6
Junghennen
300 Betriebe
28.6 – 53.0 12.5 & 0.0
Situation in der Schweiz
Serologische Untersuchung mittels ELISA 1999-2002
Serologisch positive Betriebe (%) – MG/MS-ELISA
Junghennen (625)
Legehennen (56)
L-Elterntiere (64)
1999
3.1
55.6
negativ
2000
4.7
36.8
negativ
2001
4.6
59.1
negativ
2002
4.9
60
negativ
Serologisch positive Betriebe (%) - MG- &. MS-ELISA
Junghennen (142): 8.3 - 17.0% MS-positiv, 1 x MG-positiv
Legehennen (41): 50-75% MG-positiv, 25-38% MS-positiv
L-Elterntiere (11): alle MG-negativ, 1 x MS-positiv
Serologie der Mykoplasmosen
n
Serologische Untersuchung von
nicht-geimpften Herden
u
Ja-/Nein- bzw. Positiv-/Negativ-Antwort
u
Problematik:
Auftreten unspezifischer Reaktionen
- im niedrigen Titerbereich (Titerstufe 1-3)
- wenige, vereinzelte Reaktionen
u
Modifikationen:
- Anheben des Grenzwertes (ELISA-„Cut-off“)
- höhere Serumverdünnung (z.B. SSA)
Serologie der Mykoplasmosen
n
Humorale Immunantwort nach
MG-Inaktivatimpfung (Stamm S6)
u
Ca. 3-4 Wochen p.v.:
MG/MS-ELISA (Mean): bis 8000-11000
MG-ELISA (Mean):
3000-7000
u
ELISA-Titer während der gesamten
Produktionsdauer detektierbar
u
keine Kreuzreaktionen im MS-ELISA?
(nähere Abklärung nötig)
Humorale Immunantwort nach
MG-Inaktivatimpfung (Stamm S6)
MS-ELISA
negativ
MG-ELISA-Titer nach Inaktivatimpfung
(17.-19. Alterswoche)
5000
4500
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
30
2000
40
Alterswochen
63
2001
73
Humorale Immunantwort nach
MG-Inaktivatimpfung (Stamm S6)
MS-ELISA
negativ
MG-ELISA-Titer (Mean) nach Inaktivatimpfung
(17.-19. Alterswoche)
8000
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Alterswochen
60
65
70
75
80
Titerverläufe im MG/MS-, MG- &
MS-ELISA (MG-Inaktivatimpfung)
23727
24000
21604
22000
20000
17849
18000
13045
16000
11000
8755
12419
9074
14000
12000
10000
8000
4000
13895
17533
9053
5296
4211
6000
12267
6032
3373
2121
2000
MG/MS
0
26
MG
250
34
43
Alterswochen
54
MS
64
79
Serologie der Mykoplasmosen
n
Impfung mit Lebendvakzine (MG 6/85)
Spray-Applikation 6. Alterswoche
u
keine messbare humorale Immunantwort
im MG/MS- sowie MG-ELISA
u
keine messbare humorale Immunantwort
6, 17 und 23 Wochen p.v.
Serologie der Mykoplasmosen
n
Herdenmonitoring
Kontrolle während der Aufzucht
(MG/MS-ELISA)
u Kontrolle nicht-geimpfter und mit
Lebendvakzine (MG 6/85) geimpfter
Tiere
(MG/MS-ELISA)
u Kontrolle mit MG-Inaktivatvakzine
geimpfter Tiere
(MG- & MS-ELISA)
u