Serologische Reaktionen
Werbung
Serologische Reaktionen Dr. László Szereday 2015 AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Inhaltsverzeichnis 1. Grundbegriffe 2. Aufbau des Immunsystems 3. Serologische Reaktionen 4. Serologische Diagnostik der akuten Infektionen 5. Affinität und Avidität 6. Sensitivität und Spezifizität 7. AGGLUTINATION 7.1. Objektträger-Agglutination 7.2.a. Hämagglutination 7.2.b. Hämagglutinationshemmtest 7.2.c. Indirekte Hämagglutination 7.2.d. Verkehrte indirekte Hämagglutination 7.3. Latexagglutination 7.4. Rohragglutination AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Inhaltsverzeichnis 8. PRÄZIPITATION 8.1. Ringpräzipitation 8.2. Gelpräzipitation Mancini-Test Ouchterlony-Test Immunelektrophorese 9. NEUTRALISIERUNG 10. KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION 11. DIREKTE IMMUNFLUORESZENZ 12. INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ 13. Direkte ELISA 14. Indirekte ELISA 15. Kompetitive ELISA 16. WESTERN-BLOT 17. LINE IMMUNOASSAY (LIA) 18. IMMUNCHROMATOGRAFIE AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Grundbegriffe 1. Antigen: Antigene sind solche Strukturen (Zellen, Moleküle) die vom reifen Immunsystem erkannt werden können. 2. Immunogenität: Die Immunogenität ist die Eigenschaft des Antigens eine als Immunantwort bezeichnete Reaktion des Immunsystems auszulösen. Solche Immunantworten sind z.B.: die Produktion von antigenspezifischen Immunzellen oder Antikörper. Antikörperproduktion hervorrufende Stoffe sind z.B.: Viren, Bakterien, Pollen, Antikörper von fremden menschlichen oder tierischen Körper, Zellen, Gewebe… 3. Epitop: Teil des Antigens, der den Antikörper bindet. 4. Antikörper: Eine antigenbindende Komponente der Immunantwort. Kann polyklonal oder monoklonal sein. 5. Monoklonale Antikörper: -sind Antikörper mit gleicher Spezifizität -werden von einer B-Zelllinie (B-Zellklone) produziert -richten sich gegen ein einziges Epitop AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Grundbegriffe 6. Polyklonale Antikörper: -sind eine Mischung von verschiedenen Antikörpern mit verschiedener Spezifizität -werden von mehreren B-Zellklonen produziert -richten sich gegen verschiedenen Epitope des Antigens 7. Spezifizität des Tests: Fähigkeit der Differenizierung zwischen der gesuchten Substanz (Antigen oder Antikörper) und anderen Substanzen. 8. Sensitivität der Test (Empfindlichkeit): Fähigkeit des Nachweises niedriger Konzentrationen vom Antigen oder Antikörper. 9. Kreuzreaktivität: Der Antikörper bindet nicht nur eine sondern mehrere Antigene, wenn die verschiedene Antigene gemeinsame Epitope besitzen. AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 2. Aufbau des Immunsystems Immunsystem natürliche (nicht spezifische) zelluläre Komponenten molekuläre Komponenten adaptive (spezifische) zelluläre Immunantwort AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 humorale Immunantwort 3. Serologische Reaktionen Die serologische Teste sind solche indirekt diagnostische Verfahren, die die Antigene des Erregers oder die gegen den Erreger produzierten Antikörper nachweisen können. In jedem serologischen Test dieselbe Reaktion: Antigen + Antikörper (Ag) (Ak) Ag-Ak Komplex (Immunkomplex) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 IgG IgM Antigen: 1 Epitop 2 Epitope IgA Dimer: jedes Epitop 2x AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Polymer: viele Epitopkopien 4. Serologische Diagnostik der akuten Infektionen nota bene: IgG Titeranstieg um mindestens das Vierfache oder Nachweis von IgM AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 5. Affinität und Avidität Affinität: ist die Kraft einer einzelnen Antigen-Antikörper Bindung Avidität: ist die Gesamtheit der Affinität, wo die Antikörper und/oder die Antigene mehrere Bindungsstelle haben AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 6. Sensitivität und Spezifizität Sensitivität: Nachweis niedriger Konzentrationen von Antigenen oder Antikörper. Ein Test mit niedriger Sensitivität führt zu falsch negativem Ergebnis: das Antigen oder der Antikörper ist da, ist aber nicht detektierbar. Spezifizität: Fähigkeit der Differenzierung zwischen der gesuchten Substanz (Antigen oder Antikörper) und anderen Substanzen. Ein Test mit niedriger Spezifizität führt zu falsch positivem Ergebnis: der Test detektiert einen anderen Stoff. AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 7. AGGLUTINATION Verklumpung Antikörper. von korpuskulären Antigenen AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 durch + - 1. Objektträger-Agglutination 2. Hämagglutination kvalitativ 3. Latex-Agglutination 4. Rohr-Agglutination: Antikörper Titer AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 kvantitativ 7.1.Objektträger-Agglutination Serologischer Schnelltest, bei dem das spezifisch agglutinierende Antiserum mit dem zu untersuchenden korpuskulären bakteriellen Antigen zur Reaktion gebracht wird. Ziel: Identifzierung der Bakterien IgM Ablauf: wir suspendieren die Bakterienkolonien in bekannten Antiseren auf. Positivität: sichtbare Verklumpung innerhalb Bakterium von Minuten. + Bakterium Antikörper Antigen Determinanten AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 7.2.a. Hämagglutination Hämagglutination : Agglutination der Erythrozyten (Ery‘s) + Ery‘s = Antikörper Hämagglutination Positivität: sichtbares Absetzen der Aggregate am Reagenzglasboden (bedeckt den Boden) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 7.2.b. Hämagglutinationshemmtest Verwendung: vorwiegend in der Virologie Prinzip: gewisse Viren (z.B.: Influenza) haben einen direkt hämagglutinierenden Effekt (Hämagglutinin), welcher Effekt im Test gehemmt wird. Voraussetzung: Anwesenheit der hämagglutinierenden Proteine auf der Oberfläche des gesuchten Virus. Wenn im Untersuchungsmaterial spezifische Antikörper gegen ein Hämagglutinin zu finden sind: nach Antigenzugabe kommt es zu einer Antigen-Antikörper Reaktion. Diese Immunkomplexbildung wird dadurch sichtbar, daß die danach zugegebene Erythrozyten nicht mehr agglutiniert werden. Die Reaktion ist gehemmt. AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 7.2.b. Hämagglutinationshemmtest + = Ery‘s Virus + Ery‘s + Virus Hämagglutination = Antikörper AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Hemmung der Hämagglutination 7.2.c. Indirekte Hämagglutination Das Antigen wird an die Oberfläche der Erythrozyten gebunden Ery‘s Antigen Antigenbedeckten Ery‘s AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Agglutination 7.2.d. Verkehrte indirekte Hämagglutination Der Antikörper wird an die Oberfläche der Erythrozyten gebunden Antigen Ery’s Antikörper Antikörperbedeckten Ery’s AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Agglutination 7.3. Latexagglutination -weit verbreitet -der Antikörper oder das Antigen ist an die Oberfläche der Latexperle gebunden Antigen + Latexperle Antikörper Latexagglutination AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 7.4. Rohragglutination (Antikörpertiter-Bestimmung) Ziel: Bestimmung den Antikörpertiter im Blut. Ablauf: Man gibt bekannte Dichte der Bakteriumsuspension zu einer geometrischen Serumverdünnungsreihe. Bestimmung der Menge der Antikörper durch Antikörpertiter-Bestimmung. Titer: ist der reziproke Wert der höchsten Probenverdünnung bei der noch ein positiver Testausfall auskommt. Rohr: 1 2 3 4 5 6 7 Verdünnung: 1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 Agglutination: ● ● ● ● ● ● ● 8 1:128 1:256 Titer = 1:64 AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 9 ○ ○ 8. PRÄZIPITATION Sichtbare Immunkomplexbildung von löslichen Antigenen und löslichen Antikörpern. Am häufigsten verwendet: -Rohrpräzipitation -Agargelpräzipitation AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Präzipitation Menge der Verklumpung wächst Antikörper Antigen zu viele Antikörper Äquivalenzzone zu viele Antigene Menge der Antikörper wächst AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 8.1. Ringpräzipitation Antigen Äquivalenzzone: sichtbare Präzipitation Antikörper z.B.: -Gerichtsmedizin (Herkunft des Blutes) -Lebensmittelindustrie (Herkunft des Fleisches) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 8.2. Gelpräzipitation Mancini-Test (radiale Einfachdiffusion) Agargel enthält die Antikörper. Antigenlösung wird in die ins Gel gestanzten Löcher eingefüllt. Die Reaktion mit den Antikörpern führt zur ringförmigen Präzipitaten. Ergebnis: Durch Bestimmung des Ringdurchmessers ist die Konzentration der Antigene kalkulierbar. Antikörper im Agar Antigen Diffusion Präzipitationsringe 200 mg 400 mg 800 mg 1600 mg Probe 1 Probe 2 AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Durchmesser 8.2. Gelpräzipitation Ouchterlony-Test (Doppeldiffusion) Ag At Ag und Ak diffundieren zueinander und präzipitieren in der Äquivalenzzone. Konzentration des Antikörpers At Ag AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Konzentration des Antigens 8.3. Immunelektrophorese - + anti-Serum Antikörper anti-IgA Antikörper Präzipitation IgM IgA IgG AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 9. VIRUS-NEUTRALISIERUNG Neutralisierung der Effekte der Viren. Kontrollzelle Zelle + Virus Zelle + Virus + Antikörper AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 9. NEUTRALISIERUNG Toxin-Antitoxin Test: Neutralisierung der Effekte der Exotoxine. Kontrollzelle Zelle + Toxin Zelle + Toxin + Antikörper (Antitoxin) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 10. KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION Die Probe ist für solche Antigene geeignet, die keine sichtbare serologische Reaktion bilden können. Dazu braucht man ein hämolytisches Indikatorsystem, welche aus Komplementsystem, Hämolysin und Schaferythrozyten besteht. Wenn das Antigen der Probe die Antikörper des Testserums binden kann: der so gebildete Immunkomplex bindet die Komplementkomponente und sieht man keine Hämolyse, die Erythrozyten sedimentieren. Ohne solche Immunkomplexbildung bleiben die Komplementkomponente frei was zur Hämolyse der antikörpergebundene Schaferythrozyten führt. AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Antigen Antigen + + Komplement Komplement + + Testserum: enthält Antikörper Testserum: enthält KEINE Antikörper Komplementfixierung KEINE Komplementfixierung AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Komplementfixierungsphase 10. KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION Schaf Ery’s + + Antikörper gegen Schaf Ery’s Antikörper gegen Schaf Ery’s keine Hämolyse Hämolyse Indikatorphase Schaf Ery’s zB: Chlamydia, Mycoplasma Antikörpernachweis, Wassermann’sche Reaktion (Lues) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 11. IMMUNFLUORESZENZ (IF) - Kombination von histologischen, immunologischen und biochemischen Verfahren - Nachweis von Gewebestrukturen oder zellgebundenen Komponenten Prinzip: spezifische Antigen-Antikörper Reaktion, wo die Antikörper mit Fluorochrom (z.B: FITC) markiert sind. Nach Zugabe vom spezifischen, mit fluoreszierendem Farbstoff markierten Immunserum, die positiven Patientenproben zeigen Fluoreszenz. Anwendung: Chlamydia trachomatis, Borrelia burgdorferi, Bacillus anthracis, Legionella pneumophila AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 11. Direkte IMMUNFLUORESZENZ mit Fluorochrom markierte Antikörper + Gruppe-A Streptokokken (zB aus Rachenprobe) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 12. Indirekte IMMUNFLUORESZENZ mit Fluorochrom markierte Antikörper + + Gruppe-A Streptokokken (z.B. aus Rachenprobe) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 13. ELISA Enzyme linked immunosorbent assay - antikörperbasiertes Nachweisverfahren - weit verbreitet - während der Enzymreaktion verwendet man chromogenes oder fluorogenes Substrat, welches während der Enzymreaktion einen Farbwechsel zeigt - die Enzymaktivität wird photometrisch erfasst: sie ist proportional zur Menge des gebundenen Zielmoleküls. Anhand einer Kalibrationskurve kann die Konzentration des nachzuweisenden Antigens bestimmt werden. AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 13. Direkte ELISA Methode Antigennachweis (aus Patientenproben) Nachweis des Vorhandenseins eines Antigens 1. Antikörper-Coating AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Antikörper-Coating 2. Antigen-enthaltende Patientenprobe AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Enzym 1. Antikörper-Coating 3. Enzymkonjugierter Antikörper 2. Antigen-enthaltende Patientenprobe AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Antikörper-Coating 3. Enzymkonjugierter Antikörper 2. Antigen-enthaltende Patientenprobe 4. Farbwechsel nach Substratzugabe ( ) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 14. Indirekte ELISA Methode Antitkörpernachweis (aus Patientenproben) 1. Antigen-Coating AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Antigen-Coating 2. Antikörper enthaltende Patientenprobe AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Antigen-Coating 3. Enzym-konjugierter Antikörper 2. Antikörper enthaltende Patientenprobe AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 1. Antigen-Coating 3. Enzymkonjugierter Antikörper 2. Antikörper enthaltende Patientenprobe (szérum) 4. Farbwechsel nach Substratzugabe ( ) AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 15. Kompetitive ELISA Antikörpernachweis (aus Patientenproben) with inhibitor antigen without inhibitor antigen 1. Coating detected Ag 2. Incubation 3. Substrate is added AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 16. WESTERN-BLOT - Der Western-blot, oder Immunblot, ist eine Methode, bei der die elektrophoretisch aufgetrennten Proteine aus einem Trenngel auf einen geeigneten Träger übertragen werden. - Übertragung = Blotting - Das Antigen kann man mit spezifischem Antikörper identifizieren. AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 16. WESTERN-BLOT elektrophoretische Auftrennung der viralen Antigene Übertragung der Antigene auf einen Nitrozellulose Träger Inkubation mit der Patientenprobe (Immunserum) (wenn Antikörper vorhanden sind → Bindung) Zugabe der markierten Antikörper Zugabe des Substrats, Farbwechsel AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 16. WESTERN-BLOT Früher: in HIV-Infektion als Bestätigungstest Auswertung: Nachweis von 2 o. 3 viralen Proteinen in HIV-Infektion AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 17. LINE IMMUNOASSAY (LIA) - Lia-Teststreifen: Antigene sind zur Membran gebunden - simultaner Nachweis der Antikörper gegen verschiedene Antigene ist möglich - sehr schneller Test HIV HCV Streptavidin Level 3+ Level 1+ Level +/C1 C2 E2 NS3 NS4 NS5 Kontrolle Streptavidin Level 3+ Level 1+ Level +/gp 120 gp 41 gp 31 gp 24 gp 17 gp 105 gp 36 AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Kontrolle 18. IMMUNCHROMATOGRAPHIE - Die immunchromatografischen Schnellteste sind zur schnellen und zuverlässigen Diagnostik der Mikroben sehr gut geeignet. - An die feste Matrix des Teststreifens ist der erregerspezifische, enzym-markierte Antikörper gebunden. - Der Immunkomplex wandert bis der Testzone, welche weitere spezifische Antikörper enthält. Sie binden die Immunkomplexe und es bildet sich eine sichtbare färbige Bande (positive Reaktion). - Die Antigen nicht bindende freie Antikörper wandern weiter und in der Testzone binden sie auch die dort fixierten spezifischen Antikörper: so bildet sich auch eine sichtbare färbige Bande (bei negativer Reaktion sieht man nur diese Bande). AZ ÉLETTUDOMÁNYI- KLINIKAI FELSŐOKTATÁS GYAKORLATORIENTÁLT ÉS HALLGATÓBARÁT KORSZERŰSÍTÉSE A VIDÉKI KÉPZŐHELYEK NEMZETKÖZI VERSENYKÉPESSÉGÉNEK ERŐSÍTÉSÉRE TÁMOP-4.1.1.C-13/1/KONV-2014-0001 Rota Adeno negativ
