BIO-FLASH ® BIO-FLASH® CMV IgM
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BIO-FLASH ® ® HERVORGEHOBENE ÄNDERUNGEN LESEN BIO-FLASH CMV IgM 3000-8566 50 Tests BIO-FLASH CMV IgM ist ein vollautomatisiertes, chemolumineszentes, zweistufiges Immunassay für die qualitative Bestimmung von IgM-Antikörpern gegen Cytomegalievirus im humanen Serum und Plasma mit dem Instrument BIO-FLASH. Zusammenfassung Das humane Cytomegalievirus (CMV) gehört zur Gruppe der Herpesviren, die auch das Herpes simplex-Virus Typ 1 und 2, das Varizella-Zoster-Virus und das Epstein-Barr-Virus umfasst. Ein gemeinsames Merkmal dieser Viren besteht darin, dass sie latente Infektionen verursachen können.1 Das CMV ist ein ubiquitär vorkommender Erreger, der Individuen in unterschiedlichen geographischen und wirtschaftlichen Regionen befallen kann. Der größte Teil der Bevölkerung wird irgendwann im Leben von dem Virus infiziert; in den USA sind bis zu 81% der Bevölkerung über 35 Jahren dem Virus ausgesetzt gewesen.2 Ein charakteristisches Merkmal des CMV ist, dass es nach einer primären Infektion lange Zeit latent persistieren kann und eine Reaktivierung des Virus möglich ist. Die Infektion, Reinfektion oder Reaktivierung des CMV verläuft bei normalen Erwachsenen und Kindern in der Regel symptomlos. Bei immungeschwächten Patienten, Patienten mit Krebs oder in Folge einer intrauterinen oder perinatalen Infektion können sich allerdings ernste Krankheitsfälle ergeben.1-8 Bei immungeschwächten Patienten sind Bluttransfusionen und Organtransplantationen eine wichtige Ursache für CMV-Infektion.9 Durch die Auswahl der Spender, die seronegativ für CMV-Antikörper sein müssen, kann der CMV-Übertragung an Organempfänger vorgebeugt werden. Die Reaktivierung vorhandener endogener Viren aufgrund von das Immunsystem schwächenden Therapien ist eine weitere wichtige Ursache für Pathologien bei immungeschwächten Patienten.10 Der Nachweis eines signifikanten Anstiegs der CMV-spezifischen IgG-Antikörper in paarweisen Seren sowie der Nachweis von CMV-spezifischen IgM-Antikörpern liefern Informationen bei der serologischen Diagnose der CMV-Infektion. Die serologischen Tests zur Bestimmung von Antikörpern gegen CMV geben wertvolle Information bei der Feststellung einer vergangenen Infektion, bei der Diagnose einer aktiven oder frischen Infektion oder bei Blutanalysen für Transfusionen bei Neugeborenen und immungeschwächten Transfusionsempfängern.11 Prinzip Wenn die paramagnetischen Mikropartikel von BIO-FLASH CMV IgM sich vermischen und mit der Probe inkubieren, verbinden sich diese mit den spezifischen CMV-Antigenen, die die paramagnetischen Mikropartikel umhüllen, sofern diese in der Probe enthalten sind. Nach magnetischer Trennung und einem Waschvorgang, um Reste der Probe zu beseitigen, wird ein Tracer zugegeben, der aus einem isoluminol-markierten Anti-Human-IgM-Antikörper besteht und sich an die CMV-IgM-Antikörper bindet, die von den Mikropartikeln eingefangen wurden. Nach einer zweiten Inkubation, magnetischer Trennung und einem weiteren Waschvorgang werden die Reagenzien zugegeben, die die chemolumineszente Reaktion auslösen. Das Luminometer von BIO-FLASH misst das abgegebene Licht als relative Lichteinheiten (RLU), die direkt proportional zur Konzentration des Anti-CMV-IgM der Probe sind. BIO-FLASH nutzt eine Methode zur Datenreduktion mit Anpassung an eine 4-Parameter-logistische Kurve (4PLC), um eine Masterkalibrationskurve zu erzeugen. Diese Kurve ist vordefiniert, hängt von der Charge ab und wird in dem Instrument durch den Strichcode der Kassette eingelesen. Mit der Messung der Kalibratoren (die in einem separaten Kit vertrieben werden) verwandelt sich die vordefinierte Masterkalibrationskurve in eine neue instrumentenspezifische Kalibrationskurve. Die Konzentrationen der Kalibratoren sind in den Strichcodes der Kalibratorenröhrchen enthalten. Reaktionsschema: Aktivatoren (Triggers) RLU Magnetisches Partikel Probe Tracer Lichtemission BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8566 R04 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Komponenten Reagenzkartusche Das Kit BIO-FLASH CMV IgM enthält eine Reagenzkassette für 50 Auswertungen (REF 3000-8566). Hinweis: Das Design der Kassette ist patentgeschützt (US D565,741 / Design CE 000762992-0001) Aufbau der Reagenzkassette: Die Kassette besteht aus 4 Ampullen mit folgendem Inhalt: A. 1 zylindrische Ampulle mit einer Lösung mit Mikropartikeln, die mit dem CMV-Antigen bedeckt sind, in einem Phosphatpuffer. Enthält < 0,1% Natriumazid. B. 1 Ampulle Assay-Puffer. Natriumazid. C. 1 opake Ampulle mit Tracer, der aus Isoluminolmarkiertem monoklonalem Maus Anti-Human-IgM besteht. Enthält < 0,1% Natriumazid. D. 1 leere Ampulle. Enthält < 0,1% Vorbereitung Siehe Abbildung unten. Kassette: Die Mikropartikel sedimentieren während Transport und Lagerung, weshalb sie zur Verteilung erneut gemischt werden müssen. • Kippen Sie die Kassette vor dem ersten Gebrauch 30 Mal vorsichtig hin und her, ohne dass dabei Schaum entsteht (die Luftblasen können dazu führen, dass die Flüssigkeitssensoren des Instruments falsche Ergebnisse liefern). • Stellen Sie sicher, dass die Mikropartikel sich vollständig verteilt haben. Ist dies nicht der Fall, kippen Sie die Kassette weiter hin und her, bis sie sich vollständig verteilt haben. • Wenn die Mikropartikel nicht resuspendieren oder Sie feststellen, dass der Reagenzbehälter beschädigt ist, VERWENDEN SIE DIE KASSETTE NICHT. • Haben sich die Mikropartikel verteilt, dann stellen Sie die Kassette auf eine feste Oberfläche und entfernen Sie vorsichtig die rote Transportsicherung. • Lassen Sie die Kassette auf der festen Oberfläche stehen, drücken Sie die zwei Laschen, die sich seitlich an der Behälterkappe (graues Teil) befinden, zusammen und drücken Sie so lange auf den oberen Kassettenteil, bis er blockiert. Die Laschen sind nicht mehr sichtbar, wenn dies der Fall ist. Die geöffnete Kassette nicht umdrehen. • Lassen Sie die Kassette 5 Minuten stehen, bevor Sie sie in das Instrument einsetzen. • Wenn die Kassette eingesetzt ist, mischt das Instrument den Inhalt automatisch und in periodischen Intervallen. BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8566 R04 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Vorsichtsmaßnahmen Die Reagenzien BIO-FLASH sind für die IN VITRO-Diagnostik bestimmt. Für den ausschließlichen Gebrauch durch Fachpersonal. Das Natriumazid kann mit Rohren und Abflüssen aus Blei oder Kupfer reagieren und dadurch hochexplosive Metall-Azide bilden. Bei der Entsorgung von Resten der Reagenzien reichlich Wasser nachfließen lassen. WARNUNG: BIOGEFÄHRDUNG. Entsorgen Sie alle verwendeten Materialien in für biogefährliche Materialien geeigneten Behältern. Bitte kein Reagenz wiederverwenden oder wiederholt in die Kassetten oder Ampullen einfüllen. Gefahrenklasse Nicht eingestuft. Gefahrenhinweise Keine. Sicherheitshinweise P280: Schutzhandschuhe / Schutzkleidung / Augenschutz / Gesichtsschutz tragen. P305+351+338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen. Entnahme und Aufbewahren von Proben Verwenden Sie frisches Serum (es können auch Serumröhrchen mit Trenngel verwendet werden) oder Plasma (EDTA, Lithium-Heparin, Lithium-Heparin-Röhrchen mit Trenngel, Na-Heparin und Na-Citrat). Andere Antikoagulantia müssen vor Anwendung geprüft werden. Flüssige Antikoagulantia wie Na-Citrat haben eine verdünnende Wirkung und können die Konzentration der Patientenproben herabsetzen. Die Proben dürfen nicht durch Erhitzen inaktiviert worden sein. Die Partikel in der Suspension müssen durch Zentrifugieren beseitigt werden. In den Richtlinien CLSI H18-A3 und H21-A5 finden Sie weitere Informationen über die Handhabung, den Transport, das Verarbeiten und die Aufbewahrung der Proben. Serum Die Serumproben können 8 Tage lang bei 2-8°C gelagert werden. Werden sie länger gelagert, müssen sie bei -20°C oder darunter eingefroren werden. Die Proben können maximal 3 Mal eingefroren/aufgetaut werden. Nach dem Auftauen gut vermischen. Stellen Sie bei Proben sicher, dass sich keine Luftblasen darin befinden; sollte dies doch der Fall sein, entfernen Sie vor der Analyse alle Luftblasen. Plasma Plasmaproben können 8 Tage lang bei 2-8°C gelagert werden. Wenn sie länger gelagert werden, müssen sie bei -20°C oder darunter eingefroren werden. Das Plasma bei 37°C auftauen. Die Proben nur einmal auftauen. Nach dem Auftauen gut mischen. Stellen Sie bei Proben sicher, dass sich keine Luftblasen darin befinden; sollte dies doch der Fall sein, entfernen Sie vor der Analyse alle Luftblasen. Probenumfang Der Probenumfang, der notwendig ist, um einen einzelnen BIO-FLASH CMV IgM Test durchführen zu können, variiert je nach Probenbehälter. Für eine Untersuchung sind mindestens 15 µL plus das tote Volumen, das bei 200 µL liegt, wenn die empfohlene Probenschale verwendet wird, notwendig (REF 3000-8209). Andere Materialien Die folgenden Materialien sind nicht in der Reagenzkassette enthalten und müssen separat erworben werden. REF 3000-8638 BIO-FLASH CMV IgM Calibrators (Kalibratoren) REF 3000-8639 BIO-FLASH CMV IgM Controls (Kontrollen) Für weitere Informationen, lesen Sie die jeweiligen Gebrauchsinformationen aufmerksam. Keine anderen Kalibratoren verwenden. Die Information, die das Instrument BIO-FLASH zur Kalibrierung des BIO-FLASH CMV IgM-Assay benötigt, ist in den Strichcodes der Ampullen enthalten. Das Verwenden von Kontrollen anderer Hersteller kann zu unerwarteten Ergebnissen führen. Stellen Sie sicher, dass sich in dem Instrument BIO-FLASH ausreichende Mengen der folgenden Verbrauchsmaterialien befinden, bevor Proben, Kalibrierung oder Kontrollen durchgeführt werden: REF 3000-8206 BIO-FLASH Cuvettes (Küvetten) Hinweis: Das Design der Küvetten ist patentgeschützt (US D560,816 / Design CE 000762984-0001) REF 3000-8204 BIO-FLASH Triggers (Aktivatoren) REF 3000-8205 BIO-FLASH System Rinse (Systemlösung) REF 3000-8207 BIO-FLASH Sample Diluent (Verdünnungsmittel der Proben) BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8566 R04 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Instrument / Testdurchführung Im Benutzerhandbuch von BIO-FLASH finden Sie die kompletten Anweisungen zur Durchführung eines Tests. Kalibrierung Der Strichcode der Kassette enthält eine für die Reagenziencharge gültige Masterkalibrationskurve. Dennoch wird für alle Reagenzien eine chargenspezifische Kalibrationskurve benötigt, die bis zum Verfallsdatum der Charge gilt. Eine neue Kalibrationskurve ist nötig, wenn die Kontrollergebnisse außerhalb des Akzeptanzbereiches liegen und wenn Anpassungen am Instrument vorgenommen wurden. Zur Konfigurierung einer Kalibrationskurve schlagen Sie im Benutzerhandbuch von BIO-FLASH nach. Qualitätskontrolle Zur Durchführung einer vollständigen Qualitätskontrolle werden zwei Kontrollstufen empfohlen. Die Kontrollen BIO-FLASH CMV IgM negativ und positiv wurden für eine solche Qualitätskontrolle entwickelt. Es wird empfohlen, dass jedes Labor seinen eigenen Mittelwert, seine Standardabweichung und ein Qualitätskontrollprogramm zur Überwachung seiner Labortests festlegt. An jedem Anwendungstag sollen die Kontrollen mindestens alle 24 Stunden analysiert werden. Wenn die Kontrollen außerhalb des Bereichs liegen, kann eine Neukalibrierung notwendig sein. Weitere Informationen im Benutzerhandbuch des Instrumentes. Zur Identifizierung und Lösung von ungewöhnlichen Situationen bei der Qualitätskontrolle konsultieren Sie bitte Westgard et al.12 Aufbewahrung und Stabilität Die ungeöffneten Reagenzien bleiben bis zum auf dem Kassettenetikett angegebenen Haltbarkeitsdatum stabil, wenn sie bei 2-8°C und in vertikaler Lage aufbewahrt werden. Nach dem Öffnen bleibt die ins Instrument BIO-FLASH eingesetzte oder bei 2-8°C aufbewahrte Kassette 14 Wochen stabil. Interpretation und Ergebnisse Die Menge des Analyts in jeder Probe wird durch die Lichtemission (RLU) mittels Interpolation in der eingelesenen Kalibrationskurve bestimmt. Die Ergebnisse des BIO-FLASH CMV IgM werden in S/CO (Signal/Cut-Off Verhältnis) angegeben. Dabei handelt es sich um einen Qualitätstest; die Zahlenwerte des Ergebnisses werden nur für die Menge der vorhandenen Antikörper angegeben. Die Bestimmung des Anti-CMV IgM mit dem BIO-FLASH CMV IgM Test trägt zur Diagnose einer frischen Infektion bei: • • • Proben mit einem Ergebnis < 0,90 S/CO werden als nicht reaktiv (negativ) betrachtet. Proben mit einem Ergebnis ≥ 0,90 und < 1,10 S/CO werden als unbestimmt (Grauzone) betrachtet. Proben, die als unbestimmt eingestuft werden, müssen erneut untersucht werden. Fällt das Ergebnis erneut unbestimmt aus, müssen sie als unbestimmt berichtet werden und eine andere Untersuchung mit Alternativmethode muss durchgeführt oder eine neue Probe entnommen werden. Proben mit einem Ergebnis ≥ 1,10 S/CO werden als reaktiv (positiv) bewertet. Wie bei allen sensitiven Immunassays, können nicht wiederholbare positive Ergebnisse auftreten. Ein negatives Ergebnis schließt eine CMV-Infektion nicht vollständig aus. Eine mögliche Serokonversion muss mithilfe der Bestimmung spezifischer IgG bestätigt werden, z.B. mit BIO-FLASH CMV IgG REF 3000-8563. Dazu müssen gepaarte Proben getestet werden, die in Intervallen von 2-4 Wochen entnommen werden. Einschränkungen Das Ergebnis einer einzelnen Probe ist nicht ausreichend, um eine Primärinfektion durch CMV zu diagnostizieren. Deshalb sollten neben den Ergebnissen des BIO-FLASH CMV IgM andere Daten berücksichtigt werden, wie etwa klinische Anzeichen, Anamnese, Ergebnisse anderer Untersuchungen und weitere relevante Informationen. Heterophile Antikörper im humanen Serum können mit reagierenden Immunglobulinen reagieren und in vitro-Immunassays beeinflussen.13 Die erhobenen Daten weisen darauf hin, dass die Präsenz von heterophilen Antikörpern in der Probe zu falsch positiven Ergebnissen führen können. Erwartete Ergebnisse Die CMV-Infektion kann ab der Fetalperiode in jedem Alter auftreten. In Mitteleuropa sind rund 50% der jungen Erwachsenen mit CMV infiziert. Rund 70-80% der Bevölkerung im höheren Alter sind seropositiv. Nach der Geburt ist der Index des Auftretens einer CMV-Infektion bei immunkompetenten Personen geringer als 1%.14 In eine US-Studie betrug die Prävalenz der CMV-Infektion 58,9% bei Personen der Altersgruppe ≥ 6 Jahre. Die CMV-Seroprävalenz stieg mit zunehmendem Alter kontinuierlich an, von 36,3% bei 6-11-Jährigen bis auf 90,8% bei Personen der Altersgruppe ≥ 80 Jahre.15 BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8566 R04 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Leistungsdaten HINWEIS: Die folgenden Daten sind repräsentativ; Ergebnisse von Einzelexperimenten können von diesen Daten abweichen. Methodenvergleich BIO-FLASH CMV IgM wurde in Vergleichsstudien mit anderen handelsüblichen Tests bewertet. Bewertungen Es wurden eine interne Bewertung und eine externe Bewertung im Servei de Microbiologia des Hospital de la Santa Creu i Sant Pau in Barcelona (Spanien) durchgeführt. Bei der internen Bewertung wurden 154 Proben verschiedener Herkunft, einschließlich Seren, die positiv und negativ bezüglich CMV-IgM-Antikörpern waren, mit BIO-FLASH CMV IgM in Vergleich mit einem handelsüblichen EIA CMV IgM Test geprüft. Bei der externen Bewertung wurden 311 Proben unterschiedlicher Herkunft, einschließlich Seren, die positiv und negativ bezüglich CMV-IgM-Antikörpern waren, mit BIO-FLASH CMV IgM in Vergleich mit einem handelsüblichen ELFA CMV IgM Test geprüft. Die Ergebnisse wurden global dargestellt. Bei der Bewertung wurden die unbestimmten Ergebnisse nicht berücksichtigt. Referenzmethode BIO-FLASH CMV IgM UNB NEG POS Total UNB NEG POS Total 0 3 0 3 5 338 16 359 0 8 95 103 5 349 111 465 Es wurden folgende anfängliche Ergebnisse für relative Sensitivität und Spezifität sowie Gesamtübereinstimmung ermittelt: N 457 Relative Sensitivität Wert 95% KI 92,2% 85,3% bis 96,6% Relative Spezifität Wert 95% KI 95,5% 92,8% bis 97,4% Gesamtübereinstimmung Wert 95% KI 94,7% 92,3% bis 96,6% Die abweichenden Proben wurden mit handelsüblichen ELFA und EIA CMV IgM Methoden getestet. Vier von ihnen wurden zugunsten von BIO-FLASH CMV IgM aufgelöst. Nach dem zusätzlichen Test wurden die folgenden endgültigen Ergebnisse hinsichtlich Sensitivität, Spezifität und Gesamtübereinstimmung ermittelt: N 456 Endgültige Sensitivität Wert 95% KI 94,2% 87,9% bis 97,9% Endgültige Spezifität Wert 95% KI 96,9% 94,5% bis 98,4% Endgültige Gesamtübereinstimmung Wert 95% KI 96,3% 94,1% bis 97,8% Präzision In Übereinstimmung mit den Richtlinien CLSI EP05-A wurde die Präzision in den Tests und gesamt (Test zu Test und Tag zu Tag) in zahlreichen Untersuchungen geprüft. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengefasst: Negativkontrolle Positivkontrolle Um den Cut-off-Wert Mittel (S/CO) 0,25 2,65 0,77 im Test 0,016 SD 4,4% CV 6,5% CV Gesamt 0,023 SD 4,9% CV 10,2% CV Interferenzen Studien in Übereinstimmung mit den Richtlinien CLSI EP7-A haben bewiesen, dass die folgenden potenziell störenden Substanzen die Ergebnisse des BIO-FLASH CMV IgM nicht beeinflussen: Potenziell störende Substanz Hämoglobin Indirektes Bilirubin Direktes Bilirubin Triglyzeride Rheumafaktor Konzentration 500 mg/dL 18 mg/dL 18 mg/dL 1300 mg/dL 543 UI/mL % Interferenz ≤ 10 ≤ 10 ≤ 10 ≤ 10 ≤ 10 BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8566 R04 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Kreuzreaktivität Bei der Analyse von 109 Proben, die eventuell eine Kreuzreaktion auslösen, mit dem BIO-FLASH CMV IgM Test und dem Vergleich der Ergebnisse mit handelsüblichen CMV-IgM-Tests, wurde die folgende Übereinstimmung festgestellt: Potenzielle Kreuzreaktion Anti-HIV (Antikörper gegen Humanes-Immundefizienz-Virus) HAMA (Humane Anti-Maus-Antikörper) SLE (Systemischer Lupus erythematodes) ANA (Antinukleäre Antikörper) Anti-EBV (Epstein-Barr Virus-Antikörper) Anti-PV B19 (Parvovirus B19-Antikörper) Anti-HSV 1 (Herpes simplex Typ 1-Antikörper) Anti-VZV (Varizella Zoster-Antikörper) Paraproteine IgG und IgM IgG und IgM erhöht Heterophile Antikörper RF (Rheumafaktor) Schwangere (einschließlich multipare) Übereinstimmung 5/5 5/5 8/10 5/5 4/5 7/7 5/5 5/5 5/6 8/10 9/13 9/10 22/23 BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8566 R04 06.2015 ger 0843
