BIO-FLASH ® BIO-FLASH® Toxo IgM
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BIO-FLASH ® ® HERVORGEHOBENE ÄNDERUNGEN LESEN BIO-FLASH Toxo IgM 3000-8554 50 Tests BIO-FLASH Toxo IgM ist ein vollautomatisiertes, chemolumineszentes, zweistufiges Immunassay für die qualitative Bestimmung von IgM-Antikörpern gegen Toxoplasma gondii im humanen Serum und Plasma mit dem Instrument BIO-FLASH. Zusammenfassung Bei der Toxoplasmose handelt es sich um eine Infektionskrankheit, die sowohl Menschen als auch Tiere befällt und von dem Protozoon Toxoplasma gondii1 hervorgerufen wird. Die Toxoplasmose verläuft in der Regel symptomfrei und gutartig.2 Dennoch spielt diese Infektionskrankheit bei Schwangeren eine bedeutende Rolle, da der Parasit über die Plazenta in den Kreislauf des Fötus gelangen und eine konnatale Toxoplasmose hervorrufen kann. Zahlreiche Studien haben gezeigt, dass die Schwere und das Risiko der konnatalen Toxoplasmose höher sind, wenn die Infektion während der ersten drei Schwangerschaftsmonate stattfindet.3-6 Die Folgen der konnatalen Toxoplasmose reichen von spontanem Abort und Frühgeburt bis zu neurologischen und allgemeinen Symptomen, u.a. auch Augenprobleme. Neugeborene mit konnataler Toxoplasmose können auch während mehrerer Wochen nach der Geburt symptomfrei bleiben. In zahlreichen Studien wurde bewiesen, dass die Präsenz von mütterlichem IgG gegen Toxoplasma in bestimmter Konzentration vor der Schwangerschaft den Fötus vor der Infektion durch den Parasiten schützt. Serologische Untersuchungen können auch zur Identifikation von Risikoschwangerschaften dienen; Frauen, die zum Zeitpunkt der Diagnose seronegativ sind, können während der Schwangerschaft beobachtet werden. Die Analyse der Isotypen der spezifischen Antikörper gegen Toxoplasma gondii kann helfen, den Infektionszeitpunkt herauszufinden.7,8 So können eine frische Infektion erkannt, die notwendigen vorbeugenden Maßnahmen ergriffen und eine angemessene Behandlung eingeleitet werden. Das Erkennen von spezifischem IgM ermöglicht die Überwachung der Schwangeren, da Infektionen durch Toxoplasma in der Regel nicht durch klinische Anzeichen erkannt werden können. Serologische Kontrollen sollten ein frühzeitiges Entdecken einer Serokonversion und, abhängig von der Schwere der konnatalen Infektion des Fötus, ein sofortiges Ergreifen der notwendigen Maßnahmen ermöglichen. Die Toxoplasmose kann bei Patienten mit geschwächtem Immunsystem (AIDS, Organtransplantationen) tödlich verlaufen. Bei AIDS-Patienten tritt die akute Toxoplasmose gewöhnlich als Folge der Reaktivierung einer vorangegangenen latenten Infektion auf. Es wurden aber auch Primärinfektionen diagnostiziert.9 Prinzip Wenn die paramagnetischen Mikropartikel von BIO-FLASH Toxo IgM sich vermischen und mit der Probe inkubieren, verbinden sich diese mit den spezifischen Toxoplasma-Antigenen, die die paramagnetischen Mikropartikel umhüllen, sofern diese in der Probe enthalten sind. Nach magnetischer Trennung und einem Waschvorgang, um Reste der Probe zu beseitigen, wird ein Tracer zugegeben, der aus einem isoluminol-markierten monoklonalem Anti-Human-IgMAntikörper besteht und sich an die Toxoplasma-IgM-Antikörper bindet, die von den Mikropartikeln eingefangen wurden. Nach einer zweiten Inkubation, magnetischer Trennung und einem weiteren Waschvorgang werden die Reagenzien zugegeben, die die chemolumineszente Reaktion auslösen. Das Luminometer von BIO-FLASH misst das abgegebene Licht als relative Lichteinheiten (RLU), die direkt proportional zur Konzentration des Anti-Toxoplasma-IgM der Probe sind. BIO-FLASH nutzt eine Methode zur Datenreduktion mit Anpassung an eine 4-Parameter-logistische Kurve (4PLC), um eine Masterkalibrationskurve zu erzeugen. Diese Kurve ist vordefiniert, hängt von der Charge ab und wird in dem Instrument durch den Strichcode der Kassette eingelesen. Mit der Messung der Kalibratoren (die in einem separaten Kit vertrieben werden) verwandelt sich die vordefinierte Masterkalibrationskurve in eine neue instrumentenspezifische Kalibrationskurve. Die Konzentrationen der Kalibratoren sind in den Strichcodes der Kalibratorenröhrchen enthalten. Reaktionsschema: Aktivatoren (Triggers) RLU Magnetisches Partikel Probe Tracer Lichtemission BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8554 R03 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Komponenten Reagenzkartusche Das Kit BIO-FLASH Toxo IgM enthält eine Reagenzkassette für 50 Auswertungen (REF 3000-8554). Hinweis: Das Design der Kassette ist patentgeschützt (US D565,741 / Design CE 000762992-0001) Aufbau der Reagenzkassette: Die Kassette besteht aus 4 Ampullen mit folgendem Inhalt: A. 1 zylindrische Ampulle mit einer Lösung mit Mikropartikeln, die mit dem Toxoplasma-Antigen bedeckt sind, in einem Phosphatpuffer. Enthält < 0,1% Natriumazid. B. 1 Ampulle Assay-Puffer. Natriumazid. C. 1 opake Ampulle mit Tracer, der aus Isoluminolmarkiertem monoklonalem Maus Anti-Human-IgM besteht. Enthält < 0,1% Natriumazid. D. 1 leere Ampulle. Enthält < 0,1% Vorbereitung Siehe Abbildung unten. Kassette: Die Mikropartikel sedimentieren während Transport und Lagerung, weshalb sie zur Verteilung erneut gemischt werden müssen. • Kippen Sie die Kassette vor dem ersten Gebrauch 30 Mal vorsichtig hin und her, ohne dass dabei Schaum entsteht (die Luftblasen können dazu führen, dass die Flüssigkeitssensoren des Instruments falsche Ergebnisse liefern). • Stellen Sie sicher, dass die Mikropartikel sich vollständig verteilt haben. Ist dies nicht der Fall, kippen Sie die Kassette weiter hin und her, bis sie sich vollständig verteilt haben. • Wenn die Mikropartikel nicht resuspendieren oder Sie feststellen, dass der Reagenzbehälter beschädigt ist, VERWENDEN SIE DIE KASSETTE NICHT. • Haben sich die Mikropartikel verteilt, dann stellen Sie die Kassette auf eine feste Oberfläche und entfernen Sie vorsichtig die rote Transportsicherung. • Lassen Sie die Kassette auf der festen Oberfläche stehen, drücken Sie die zwei Laschen, die sich seitlich an der Behälterkappe (graues Teil) befinden, zusammen und drücken Sie so lange auf den oberen Kassettenteil, bis er blockiert. Die Laschen sind nicht mehr sichtbar, wenn dies der Fall ist. Die geöffnete Kassette nicht umdrehen. • Lassen Sie die Kassette 5 Minuten stehen, bevor Sie sie in das Instrument einsetzen. • Wenn die Kassette eingesetzt ist, mischt das Instrument den Inhalt automatisch und in periodischen Intervallen. BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8554 R03 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Vorsichtsmaßnahmen Die Reagenzien BIO-FLASH sind für die IN VITRO-Diagnostik bestimmt. Für den ausschließlichen Gebrauch durch Fachpersonal. Das Natriumazid kann mit Rohren und Abflüssen aus Blei oder Kupfer reagieren und dadurch hochexplosive Metall-Azide bilden. Bei der Entsorgung von Resten der Reagenzien reichlich Wasser nachfließen lassen. WARNUNG: BIOGEFÄHRDUNG. Entsorgen Sie alle verwendeten Materialien in für biogefährliche Materialien geeigneten Behältern. Bitte kein Reagenz wiederverwenden oder wiederholt in die Kassetten oder Ampullen einfüllen. Gefahrenklasse Nicht eingestuft. Gefahrenhinweise Keine. Sicherheitshinweise P280: Schutzhandschuhe / Schutzkleidung / Augenschutz / Gesichtsschutz tragen. P305+351+338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter spülen. Entnahme und Aufbewahren von Proben Verwenden Sie frisches Serum (es können auch Serumröhrchen mit Trenngel verwendet werden) oder Plasma (EDTA, Lithium-Heparin, Lithium-Heparin-Röhrchen mit Trenngel, Na-Heparin und Na-Citrat). Andere Antikoagulantia müssen vor Anwendung geprüft werden. Flüssige Antikoagulantia wie Na-Citrat haben eine verdünnende Wirkung und können die Konzentration der Patientenproben herabsetzen. Die Proben dürfen nicht durch Erhitzen inaktiviert worden sein. Die Partikel in der Suspension müssen durch Zentrifugieren beseitigt werden. In den Richtlinien CLSI H18-A3 und H21-A5 finden Sie weitere Informationen über die Handhabung, den Transport, das Verarbeiten und die Aufbewahrung der Proben. Serum Die Serumproben können 8 Tage lang bei 2-8°C gelagert werden. Werden sie länger gelagert, müssen sie bei -20°C oder darunter eingefroren werden. Die Proben können maximal 3 Mal eingefroren/aufgetaut werden. Nach dem Auftauen gut vermischen. Stellen Sie bei Proben sicher, dass sich keine Luftblasen darin befinden; sollte dies doch der Fall sein, entfernen Sie vor der Analyse alle Luftblasen. Plasma Plasmaproben können 8 Tage lang bei 2-8°C gelagert werden. Wenn sie länger gelagert werden, müssen sie bei -20°C oder darunter eingefroren werden. Das Plasma bei 37°C auftauen. Die Proben nur einmal auftauen. Nach dem Auftauen gut mischen. Stellen Sie bei Proben sicher, dass sich keine Luftblasen darin befinden; sollte dies doch der Fall sein, entfernen Sie vor der Analyse alle Luftblasen. Probenumfang Der Probenumfang, der notwendig ist, um einen einzelnen BIO-FLASH Toxo IgM Test durchführen zu können, variiert je nach Probenbehälter. Für eine Untersuchung sind mindestens 15 µL plus das tote Volumen, das bei 200 µL liegt, wenn die empfohlene Probenschale verwendet wird, notwendig (REF 3000-8209). Andere Materialien Die folgenden Materialien sind nicht in der Reagenzkassette enthalten und müssen separat erworben werden. REF 3000-8555 BIO-FLASH Toxo IgM Calibrators (Kalibratoren) REF 3000-8556 BIO-FLASH Toxo IgM Controls (Kontrollen) Für weitere Informationen, lesen Sie die jeweiligen Gebrauchsinformationen aufmerksam. Keine anderen Kalibratoren verwenden. Die Information, die das Instrument BIO-FLASH zur Kalibrierung des BIO-FLASH Toxo IgM-Assay benötigt, ist in den Strichcodes der Ampullen enthalten. Das Verwenden von Kontrollen anderer Hersteller kann zu unerwarteten Ergebnissen führen. Stellen Sie sicher, dass sich in dem Instrument BIO-FLASH ausreichende Mengen der folgenden Verbrauchsmaterialien befinden, bevor Proben, Kalibrierung oder Kontrollen durchgeführt werden: REF 3000-8206 BIO-FLASH Cuvettes (Küvetten) Hinweis: Das Design der Küvetten ist patentgeschützt (US D560,816 / Design CE 000762984-0001) REF 3000-8204 BIO-FLASH Triggers (Aktivatoren) REF 3000-8205 BIO-FLASH System Rinse (Systemlösung) REF 3000-8207 BIO-FLASH Sample Diluent (Verdünnungsmittel der Proben) BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8554 R03 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Instrument / Testdurchführung Im Benutzerhandbuch von BIO-FLASH finden Sie die kompletten Anweisungen zur Durchführung eines Tests. Kalibrierung Der Strichcode der Kassette enthält eine für die Reagenziencharge gültige Masterkalibrationskurve. Dennoch wird für alle Reagenzien eine chargenspezifische Kalibrationskurve benötigt, die bis zum Verfallsdatum der Charge gilt. Eine neue Kalibrationskurve ist nötig, wenn die Kontrollergebnisse außerhalb des Akzeptanzbereiches liegen und wenn Anpassungen am Instrument vorgenommen wurden. Zur Konfigurierung einer Kalibrationskurve schlagen Sie im Benutzerhandbuch von BIO-FLASH nach. Qualitätskontrolle Zur Durchführung einer vollständigen Qualitätskontrolle werden zwei Kontrollstufen empfohlen. Die Kontrollen BIO-FLASH Toxo IgM negativ und positiv wurden für eine solche Qualitätskontrolle entwickelt. Es wird empfohlen, dass jedes Labor seinen eigenen Mittelwert, seine Standardabweichung und ein Qualitätskontrollprogramm zur Überwachung seiner Labortests festlegt. An jedem Anwendungstag sollen die Kontrollen mindestens alle 24 Stunden analysiert werden. Wenn die Kontrollen außerhalb des Bereichs liegen, kann eine Neukalibrierung notwendig sein. Weitere Informationen im Benutzerhandbuch des Instrumentes. Zur Identifizierung und Lösung von ungewöhnlichen Situationen bei der Qualitätskontrolle konsultieren Sie bitte Westgard et al.10 Aufbewahrung und Stabilität Die ungeöffneten Reagenzien bleiben bis zum auf dem Kassettenetikett angegebenen Haltbarkeitsdatum stabil, wenn sie bei 2-8 °C und in vertikaler Lage aufbewahrt werden. Nach dem Öffnen bleibt die ins Instrument BIO-FLASH eingesetzte oder bei 2-8 °C aufbewahrte Kassette 8 Wochen stabil. Interpretation und Ergebnisse Die Menge des Analyts in jeder Probe wird durch die Lichtemission (RLU) mittels Interpolation in der eingelesenen Kalibrationskurve bestimmt. Die Ergebnisse des BIO-FLASH Toxo IgM werden in S/CO (Signal/Cut-Off Verhältnis) angegeben. Dabei handelt es sich um einen Qualitätstest; die Zahlenwerte des Ergebnisses werden nur für die Menge der vorhandenen Antikörper angegeben. Die Bestimmung des Anti-Toxoplasma IgM mit dem BIO-FLASH Toxo IgM Test trägt zur Diagnose einer frischen Infektion bei: • • • Proben mit einem Ergebnis < 0,80 S/CO werden als nicht reaktiv (negativ) betrachtet. Proben mit einem Ergebnis ≥ 0,80 und < 1,00 S/CO werden als unbestimmt (Grauzone) betrachtet. Proben, die als unbestimmt eingestuft werden, müssen erneut untersucht werden. Fällt das Ergebnis erneut unbestimmt aus, müssen sie als unbestimmt berichtet werden und eine andere Untersuchung mit Alternativmethode muss durchgeführt oder eine neue Probe entnommen werden. Proben mit einem Ergebnis ≥ 1,00 S/CO werden als reaktiv (positiv) bewertet. Wie bei allen sensitiven Immunassays, können nicht wiederholbare positive Ergebnisse auftreten. Ein negatives Ergebnis schließt eine Toxoplasma-Infektion nicht vollständig aus. Eine mögliche Serokonversion muss mithilfe der Bestimmung spezifischer IgG bestätigt werden, z.B. mit BIO-FLASH Toxo IgG REF 3000-8551. Dazu müssen gepaarte Proben getestet werden, die in Intervallen von 2-3 Wochen entnommen werden. Einschränkungen Das Ergebnis einer einzelnen Probe ist nicht ausreichend, um eine Primärinfektion durch Toxoplasmen zu diagnostizieren. Deshalb sollten neben den Ergebnissen des BIO-FLASH Toxo IgM andere Daten berücksichtigt werden, wie etwa klinische Anzeichen, Anamnese, Ergebnisse anderer Untersuchungen und weitere relevante Informationen. Heterophile Antikörper im humanen Serum können mit reagierenden Immunglobulinen reagieren und in vitroImmunassays beeinflussen.11 Die erhobenen Daten weisen darauf hin, dass die Präsenz von heterophilen Antikörpern in der Probe zu fälschlich positiven Ergebnissen führen können. Erwartete Ergebnisse Etwa ein Drittel der Weltbevölkerung hat Toxoplasmose-Antikörper, es bestehen jedoch große Unterschiede zwischen den jeweiligen Ländern sowie auch innerhalb derselben. In England und Wales steigt die Prävalenz der Toxoplasmose-Antikörper pro Lebensjahr um 0,5% - 1,0% und erreicht rund 30% bei den etwa 40-jährigen. In Frankreich dagegen fallen bei 80% - 90% der Bevölkerung in diesem Alter die Antikörper-Tests positiv aus.12 BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8554 R03 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® In einer multizentrischen Studie, die an über 16000 Serumproben von Schwangeren in Barcelona (Spanien) durchgeführt wurde, wiesen 28,6% Toxoplasmose-Antikörper auf. Bei 2,2% der Frauen mit Anti-ToxoplasmaAntikörpern wurden spezifische IgM-Antikörper festgestellt.13 In einer Studie, die zwischen 1992 und 1994 in Norwegen durchgeführt wurde und an der 35940 Schwangere teilnahmen, testeten 10,9% der Probanden vor Beginn der Schwangerschaft positiv auf Toxoplasma-Antikörper. 0,17% der Frauen, die zuvor nicht infiziert waren, wiesen während der Schwangerschaft eine Primärinfektion auf.14 Leistungsdaten HINWEIS: Die folgenden Daten sind repräsentativ; Ergebnisse von Einzelexperimenten können von diesen Daten abweichen. Methodenvergleich BIO-FLASH Toxo IgM wurde in Vergleichsstudien mit anderen handelsüblichen Tests bewertet. Bewertung Es wurden eine interne Bewertung und eine externe Bewertung durch Servei de Microbiologia in der Klinik Hospital de la Santa Creu i Sant Pau in Barcelona (Spanien) durchgeführt. Bei der internen Prüfung wurden 154 Proben verschiedener Herkunft, einschließlich Seren, die positiv und negativ bezüglich Toxoplasma-IgM-Antikörper waren, mit BIO-FLASH Toxo IgM in Vergleich mit einem handelsüblichen EIA Toxo IgM Test geprüft. Bei der externen Bewertung wurden 426 Proben unterschiedlicher Herkunft, einschließlich Seren, die positiv und negativ bezüglich Toxoplasma-IgM-Antikörper waren, mit BIO-FLASH Toxo IgM in Vergleich mit einem handelsüblichen MEIA Toxo IgM Test geprüft. Die Ergebnisse wurden global bekannt gemacht. Bei der Bewertung wurden die unbestimmten Ergebnisse nicht berücksichtigt. Referenzmethode BIO-FLASH Toxo IgM UNB NEG POS Total UNB NEG POS Total 0 1 2 3 18 415 33 466 5 12 94 111 23 428 129 580 Es wurden folgende anfängliche Ergebnisse für relative Sensitivität und Spezifität sowie Gesamtübereinstimmung ermittelt: N 554 Relative Sensitivität Wert 95% KI 88,7% 81,1% bis 94,0% Relative Spezifität Wert 95% KI 92,6% 89,8% bis 94,9% Gesamtübereinstimmung Wert 95% KI 91,9% 89,3% bis 94,0% Die abweichende Probe wurde mit einer handelsüblichen ELFA Toxo IgM-Methode analysiert und in drei Fällen wurde zugunsten von BIO-FLASH Toxo IgM bewertet. Nach dem zusätzlichen Test wurden die folgenden endgültigen Ergebnisse hinsichtlich Sensitivität, Spezifität und Gesamtübereinstimmung ermittelt: N 555 Endgültige Sensitivität Wert 95% KI 89,6% 82,2% bis 94,7% Endgültige Spezifität Wert 95% KI 92,9% 90,1% bis 95,1% Endgültige Gesamtübereinstimmung Wert 95% KI 92,3% 89,7% bis 94,3% Insgesamt 92 Proben der externen Bewertung stammten von schwangeren Frauen. Die Werte bezüglich Sensitivität und Spezifität blieben ähnlich zu denen der Gesamtpopulation. CDC Panel Das Panel humaner Seren, CDC Panel Toxoplasma 1998 Humanserum, das aus 32 positiven Serumproben und 65 negativen Serumproben besteht, wurde mit dem BIO-FLASH Toxo IgM Test geprüft und es wurden 96,9% Sensitivität und 93,8% Spezifität berichtet. Präzision In Übereinstimmung mit den Richtlinien CLSI EP05-A wurde die Präzision in den Tests und gesamt (Test zu Test und Tag zu Tag) in zahlreichen Untersuchungen geprüft. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengefasst: BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8554 R03 06.2015 ger 0843 BIO-FLASH ® Negativkontrolle Positivkontrolle Um den Cut-off-Wert Mittel (S/CO) 0,23 2,53 0,82 im Test 0,031 SD 4,9% CV 4,4% CV Gesamt 0,032 SD 7,8% CV 6,6% CV Interferenzen Studien in Übereinstimmung mit den Richtlinien CLSI EP7-A haben bewiesen, dass die folgenden potenziell störenden Substanzen die Ergebnisse des BIO-FLASH Toxo IgM nicht beeinflussen: Potenziell störende Substanz Hämoglobin Indirektes Bilirubin Direktes Bilirubin Triglyzeride Rheumafaktor Konzentration 500 mg/dL 18 mg/dL 18 mg/dL 1300 mg/dL 800 UI/mL % Interferenz ≤ 10 ≤ 10 ≤ 10 ≤ 10 ≤ 10 Kreuzreaktivität Bei der Analyse von 202 Proben, die eventuell eine Kreuzreaktion auslösen, mit dem BIO-FLASH Toxo IgM Test und dem Vergleich der Ergebnisse mit handelsüblichen Toxo-IgM-Tests, wurde die folgende Übereinstimmung festgestellt: Potenzielle Kreuzreaktion Anti-Röteln-IgM Anti-CMV IgM (Zytomegalievirus-Antikörper) Anti-HIV (Antikörper gegen Humanes-Immundefizienz-Virus) HAMA (Humane Anti-Maus-Antikörper) SLE (Systemischer Lupus erythematodes) ANA (Antinukleäre Antikörper) Anti-EBV (Epstein-Barr Virus-Antikörper) Anti-PV B19 (Parvovirus B19-Antikörper) Anti-HSV 1 (Herpes simplex Typ 1-Antikörper) Anti-VZV (Varizella Zoster-Antikörper) Paraproteine IgG und IgM IgG und IgM erhöht Heterophile Antikörper RF (Rheumafaktor) Schwangere (einschließlich multipare) Übereinstimmung 5/5 5/5 9/9 3/3 8/10 11/11 4/4 10/10 4/5 4/4 6/6 6/6 2/4 10/10 96/110 BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN 3000-8554 R03 06.2015 ger 0843
