Inhaltsverzeichnis

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I. Einleitung..........................................Error! Bookmark not defined.
1. Transkription ...................................................................... Error! Bookmark not defined.
1.1
Die gewebespezifische Transkription .................. Error! Bookmark not defined.
1.2
Der gewebespezifische Transkriptionsfaktor HNF1 ......... Error! Bookmark not
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1.3
Mutationen im Transkriptionsfaktor HNF1 des Menschen .....Error! Bookmark
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1.4
Der Krallenfrosch Xenopus laevis als Modellorganismus .. Error! Bookmark not
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1.5
Der Pronephros von Xenopus laevis..................... Error! Bookmark not defined.
2. Zielsetzung der Arbeit ....................................................... Error! Bookmark not defined.
II. Material und Methoden ..................Error! Bookmark not defined.
1. Chemikalien Puffer und Enzyme ...................................... Error! Bookmark not defined.
2. Molekularbiologische Standartmethoden und Expressionsvektoren .Error! Bookmark
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2.1
Expressionsvektoren............................................. Error! Bookmark not defined.
2.2
Reportergene ........................................................ Error! Bookmark not defined.
3. Zellkultur von HeLa- und HEK293- Zellen ..................... Error! Bookmark not defined.
4. Transiente Transfektion, Luciferaseassay, Herstellung von Kernextrakten und
Immunfluoreszenz............................................................................................. ........... Error!
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4.1
Luciferaseassay .................................................... Error! Bookmark not defined.
4.2
Herstellung von Kernextrakten aus HeLa Zellen . Error! Bookmark not defined.
4.3
Immunofluoreszenz von HeLa Zellen .................. Error! Bookmark not defined.
5. Gelretardationsanalyse ...................................................... Error! Bookmark not defined.
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6. Gekoppelte in vitro Transkription / Translation und Western Blotting ............. Error!
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6.1
Gekoppelte in vitro Transkription / Translation .. Error! Bookmark not defined.
6.2
Western Blotting .................................................. Error! Bookmark not defined.
7. Haltung, in vitro Befruchtung und Kultur der Embryonen des Krallenfrosches
Xenopus laevis.................................................................................................................
.................................................................................................. Error! Bookmark not defined.
8. In vitro Synthese von mRNA und Injektion der Embryonen ....... Error! Bookmark not
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8.1
In vitro Synthese von mRNA ............................... Error! Bookmark not defined.
8.2
Injektion der Embryonen ...................................... Error! Bookmark not defined.
9. Immunfluoreszenz von Xenopus laevis Larven ............... Error! Bookmark not defined.
10. Statistische Auswertung ................................................... Error! Bookmark not defined.
11. Whole mount in situ Hybridisierung von Xenopus laevis Embryonen .............. Error!
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III. Ergebnisse ........................................Error! Bookmark not defined.
1. Mutationen im Transkriptionsfaktor HNF1 verändern dessen EigenschaftenError!
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1.1
Die HNF1 Mutanten kodieren für Proteine unterschiedlicher Größe ......... Error!
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1.2
Unterschiede in der DNA-Bindungsfähigkeit der HNF1 Mutanten ........... Error!
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1.3
Unterschiede in der Dimerisierung der HNF1 Mutanten .. Error! Bookmark not
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1.4
Die HNF1 Mutanten zeigen ein unterschiedliches Transaktivierungspotential
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1.5
Keine der HNF1 Mutanten wirkt dominant negativ ......... Error! Bookmark not
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1.6
Unterschiede in der zellulären Lokalisation der HNF1 Mutanten .............. Error!
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2. Durch Überexpression von mutiertem HNF1 in Xenopus laevis Embryonen
kommt es zu Störungen bei der Pronephrosentwicklung ... Error! Bookmark not defined.
2.1
Reduktion des Pronephros durch Injektion der Mutante Y352 ..Error! Bookmark
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2.2
Vergrößerung des Pronephros durch Injektion der Mutanten S151P, E101X,
R177X, P159, Q243 und A263 ............................ Error! Bookmark not defined.
3. Die Expression früher Nierenmarkergene wird durch mutiertes HNF1 nicht
beeinflusst..................................................................................................................... . Error!
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IV. Diskussion .........................................Error! Bookmark not defined.
1. Basierend auf den molekularen Daten kann man zwei Gruppen von HNF1
Mutanten unterscheiden ........................................................ Error! Bookmark not defined.
2. Basierend auf dem Einfluss der HNF1 Mutanten auf die Pronephrosentwicklung
im Xenopus kann man zwei Gruppen von Mutanten unterscheiden .....Error! Bookmark
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3. Zusammenhang zwischen mutiertem HNF1 und Erkrankungen des Menschen
.................................................................................................. Error! Bookmark not defined.
4. Zusammenhang zwischen mutiertem HNF1 und nonsense mediated mRNA decay
(NMD) ...................................................................................... Error! Bookmark not defined.
5. Mutationen im HNF1 Gen haben keinen Einfluss auf die Expression anderer
nierenspezifischer Gene ......................................................... Error! Bookmark not defined.
V. Zusammenfassung ...........................Error! Bookmark not defined.
VI. Literaturverzeichnis.................................................................70