neue ansätze für die frühdiagnostik der bovinen map

JUSTUS-LIEBIGUNIVERSITÄT
GIESSEN
Fachbereich
Veterinärmedizin
NEUE ANSÄTZE FÜR DIE
FRÜHDIAGNOSTIK
DER BOVINEN MAP-INFEKTION
C. Menge1, R. Bauerfeind1, A. Abdulmawjood2, Ö. Akinden2, M. Fischer2, H. Wagner2,
T. Seeger3, P.S. Bridger1, S. Schillinger1, H. Bulun1, K. Doll3, und M. Bülte2
1
Institut für Hygiene und Infektionskrankheiten der Tiere,
Institut für Tierärztliche Nahrungsmittelkunde und
3 Klinik für Wiederkäuer und Schweine
2
gefördert durch das Bundesministerium
für Ernährung, Landwirtschaft und Verbraucherschutz
Infektionsverlauf bei der Paratuberkulose
Geburt
1
2
3
4
Zeit [Jahre]
Infektion
103 - 104 Bakterien
Erregerausscheidung
intra utero oder durch kontaminierte(s) Kolostrum / Milch
Beginn: 1,5 – 4,5 Jahre
Zahl ausgeschiedener
Erreger < 108 / g Kot
Immunantwort
zelluläre Immunität
Klinische
Manifestation
Antikörper
Beginn: 2 - 4 Jahre
Inkubationszeit
Infektionskrankheit
modifiziert nach Gerlach, 2002
Projekt: Frühdiagnostik von MAP-Infektionen beim Rind
- Longitudinalstudien Inokulation
(3 bis 4 x 108 KbE/Dosis)
0
2.d
4.d
Serum
••
•
1.Mo 2.Mo 3.Mo 4.Mo 5.Mo 6.Mo
Serum, Vollblut, Kot
••
•
† 12.Mo
Darmlymphknotenbioptat
Real Time-PCR-Verfahren zum Nachweis
von Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis
Bovine Kotproben (Feldproben)
Erregergehalt
Anzahl positive / getestete Proben
Anzahl
IS900
nested-PCR1
Triplex Real
Time-PCR2
(Ergebnis Kotkultur)
+3
(> 50 KbE/g)
19
19/19
19/19
+2
(10-50 KbE/g)
11
10/11
11/11
+1
(< 10 KbE/g)
23
10/23
20/23
(0 KbE/g)
55
0
0
0
108
1
Bull et al., 2003
2
Schönenbrücher et al., 2008; Zielgene: F57 + ISMav2
Zielgen: IS900
Schönenbrücher et al., 2008
Real Time-PCR-Verfahren zum MAP-Nachweis
- Kotuntersuchungen Kontrollgruppe:
alle Ergebnisse negativ
Infektionsgruppe 1:
KALB 1
KALB 2
KALB 3
KALB 4
KALB 5
KALB 6
d.p.i
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
1
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
x
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
5
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
7
3
3
3
0
3
0
3
0
3
3
0
0
9
3
0
3
0
3
0
3
0
2
0
3
0
11
3
0
3
0
3
0
3
0
1
0
1
0
13
3
0
3
0
3
0
3
0
0
0
3
0
20
0
0
1
0
0
0
1
0
1
0
1
3
27
1
0
0
3
0
0
0
0
0
0
3
0
41
1
0
0
0
3
3
1
0
0
0
1
0
55
2
0
3
3
0
0
0
0
1
0
2
0
69
0
3
2
3
2
3
0
3
1
0
0
3
83
2
3
3
3
x
3
0
0
0
0
0
0
97
0
0
x
x
1
3
0
0
0
0
0
3
111
0
0
3
3
0
0
0
0
0
0
x
0
125
0
0
1
3
0
0
0
0
0
0
x
0
139
0
0
0
3
x
0
0
0
0
0
x
x
153
0
0
x
0
0
0
0
0
x
0
x
x
167
0
0
0
0
0
0
0
0
x
x
x
x
181
0
0
0
0
x
0
0
0
x
x
x
x
0
negativ
1/2
fraglich
3
positiv
x
nicht
auswertbar
x
noch nicht
ausgewertet
Poster von Fischer et al.
Endoskopie-basierte Gewinnung von Darmlymphknoten-Bioptaten
 Aufsuchen des jeweiligen
Darmabschnitts
(Caecum, Ileum, Jejunum)
und Fixation mit Darmfaßzange
 Laparoskopische Identifikation
und Fixation des benachbarten
Lymphknotens mit der Faßzange
 Biopsie des Lymphknotens mittels
Biopsiezange mit Dorn
Poster von Seeger et al.
Real Time-PCR-Verfahren zum MAP-Nachweis
- Lymphknotenuntersuchungen Kontrollgruppe:
alle Ergebnisse negativ
Infektionsgruppe 1:
d.p.i
KALB 1
KALB 2
KALB 3
KALB 4
KALB 5
KALB 6
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
PCR
Kultur
14
0
3
0
3
0
3
0
0
0
0
2
3
30
0
3
3
0
0
3
0
0
0
0
0
0
90
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
170
3
3
3
x
3
3
3
3
3
3
3
x
0
= neg.
1/2
= fraglich
3
= pos.
x
= noch nicht ausgewertet
Poster von Fischer et al.
MAP-spezifische zelluläre Immunantwort
MAP-Antigen
M
IFN-γ
NK
Tmem
CD4
CD45RO
IFN-γ
Teff
CD25/26
IFN-γ
-T
Nachweis MAP-spezifischer CD4+ T-Zellen
- IFN--Bildung Restimulation
IFN- -Bildung
Reaktionstiter [x-fach vs. Mediumkontr.]
Blutproben
14
MAP
M. phlei
infizierte Tiere1
Kontrolltiere1
12
1
Median + Min, Max, (n = 6 / Gruppe)
10
8
6
4
2
0
0
4
8
12
16
20
24
28
32
Wochen nach Inokulation
Poster von Menge et al.
Nachweis MAP-spezifischer CD4+ T-Gedächtniszellen
- CD25-Expression Restimulation
Blutproben
CD25-Expression auf CD4 +/CD45RO+ Zellen
Reaktionstiter [x-fach vs. Mediumkontr.]
100,0
MAP
M. phlei
infizierte Tiere1
Kontrolltiere1
1
Median + Min, Max, (n = 6 / Gruppe)
10,0
1,0
0,1
0
4
8
12
16
24
32
Wochen nach Inokulation
Poster von Menge et al.
FRÜHDIAGNOSTIK VON INFEKTIONEN MIT
MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS
(MAP) BEI RINDERN
gefördert durch das Bundesministerium
für Ernährung, Landwirtschaft und Verbraucherschutz
beteiligte Institutionen:
Prof. Dr. Michael Bülte
Institut für Tierärztliche Nahrungsmittelkunde
Prof. Dr. Rolf Bauerfeind / PD Dr. Christian Menge
Institut für Hygiene und Infektionskrankheiten
Prof. Dr. Klaus Doll
Klinik für Wiederkäuer und Schweine (Innere Medizin und Chirurgie)
TransMIT GmbH Gießen