MMLV Reverse Transkriptase
Werbung
Datasheet .. A good decision .. MMLV Reverse Transkriptase Anwendungen: - "End-labeling" von DNA - RT PCR - Erststrang-Synthese für RT-PCR-Reaktionen oder cDNA-Banken - Zweistrang-Herstellung für cDNA-Banken oder Klonierungen - Ausfüllen und Labeling von DNA-3' Enden mit 5'-Überhängen Beschreibung: M-MLV Reverse Transkriptase ist ein Genprodukt des Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV) mit RNA abhängiger DNA-Polymerase-Aktivität. Die normalerweise vorhandene RNase H-Aktivität wurde durch eine Deletion depletiert. Das Molekulargewicht des Enzyms beträgt 69 kDa. Konzentration: 200 u/µl Lagerpuffer: 200 mM Kaliumphosphat (pH 7.2), 0.2% Triton X-100, 2 mM DTT and 50% Glyzerin Reaktionspuffer 5X: 250 mM Tris-HCl (pH8.3), 375 mM KCl, 15 mM MgCl2 und 50 mM DTT Einheitenbestimmung: Eine Unit ist die Menge an Enzym, die 1 nmol dTTP mit poly(A)-oligo(dT) als Template-Primer bei 37°C in 10 min in säureunlösliches Material umwandelt. Qualitätstests: - Reinheit > 90 % in SDS-Polyacrylamidegel - Endo- und Exonuklease Aktivitätstests - Frei von RNase und DNase Anwendung: Standard-Protokoll: Wir empfehlen den Ansatz von zwei Mischungen Mix I Komponenten a. Total RNA or b. PolyA RNA Menge/Konz. 1-5 µg c. Strand-specific primer or d. Oligo dT / Randomprimer pro µg of RNA steriles Wasser (PCR-Grade) Inkubation 10 Min 10 - 15 Min (for c. spezifische Primer) or 5 min (für d. Oligo dT / Randomprimer ) 10 pM 50-500 ng 250-500 ng bis 8 µl Temperatur 70 °C Raumtemperatur auf Eis GeneON .. a good decision .. Contact Phone +49-(0)-621- 5720 864 Fax: +49-(0)-621-5724 462 E-Mail: mailto:[email protected] WEB: http://www.taq-dna.com/ Version: 25.10.2009 AS Datasheet .. A good decision .. Mix II Komponenten 5X Reaktionspuffer dNTP Mix (je 10 mM = 40 mM) optional: RNAsin MMLV Reverase (200 u/µl) steriles Wasser (PCR-Grade) Mischen von Mix I und Mix II und vortexen Schritt Temperatur 1.) 30 - 115 Min 10 Min (Inaktivierung des Enzyms) 1.) 2.) Menge/Konz. 4 µl 1 µl 20-40 units 200 units up to 20 µl 37 - 55°C 65-70°C 2.) 30 Min für cDNA mit 500 bp; 115 Min für 1,5 kb Abhängig von RNA: Höhere Temperaturen (bis 55°C) für höher "strukturierte" RNA; Ein pH-Wert von 8.8 begünstigt die Reaktion Transport: mit Kühlakkus Lagerung: bei -20°C für 24 Monate Bestellinformation: Kat.-Nr: 105-100 105-250 Beschreibung MMLV Reverse Transkriptase MMLV Reverse Transkriptase Menge 10.000 units 5x10.000 units GeneON .. a good decision .. Contact Phone +49-(0)-621- 5720 864 Fax: +49-(0)-621-5724 462 E-Mail: mailto:[email protected] WEB: http://www.taq-dna.com/ Version: 25.10.2009 AS
