Klein [Schreibgeschützt]
Werbung
PRRSV Genetische Variabilität von PRRSV in Österreich PRRS • Erstes Auftreten: – Ende 80er in USA (Kaffaber, 1989) – Anfang 90er in Europa (Wensvoort et al., 1991) – 1993 in Österreich (Krassnig et al., 1994) • Ursache: – Arterivirus (Wensvoort et al., 1991) – Behüllte, +ss RNA Virus mit 8 ORFs, ca. 15 kb • 2 Genotypen: – Amerikanisch – Europäisch (inkl. litauische Stämme) • Bis 1996 nur europäische Sequenzen in Europa gefunden 1 Vakzinierung • Impfung mit attenuierten amerikanischen Stamm (MLV Resp PRRS) in Dänemark • Infektion nicht geimpfter Tieren (Madsen et al., 1998) • Nachweis amerikanischer Stämme in Europa • Situation in Österreich? Konsequenzen • Einfluß von Mutationen auf Ergebnisse von PCR-basierten Tests: – Falsch negative Ergebnisse – Unterschätzung des ‚viral load‘ 2 Einfluss von Mutationen Wenige Mutationen: Viele Mutationen: 1-2 Fehlpaarungen Unterschätzung des viral load XXX Q R XXX Q R Threshold cycle number > 2 Fehlpaarungen Falsch-negative Resultate 45 40 35 two mismatches in reverse primer 3.3 log 30 11 CT 25 no mismatches 20 Q 0 R 1 2 3 4 5 6 7 log RNA copy number Klein et al. (1999) Electrophoresis Klein et al. (2001) J. AIDS Ziel • Charakterisierung der PRRSV Sequenzen in Österreich • Basis für die Entwicklung von ‚regiontailored‘ Assays 3 PRRSV ORF1a ORF2 ORF1b ORF4 ORF6 ORF3 ORF5 ORF7 ORF6 ORF4 ORF7 ORF5 Andreyev P420 Andreyev P620 Oleksiewicz EU ORF5 F Suarez EU ORF5 F Oleksiewicz EU ORF5 R LV607 LV981 LV330 Suarez EU ORF5 R ORF 7 Proben EU AM 429 bp 394 bp Verdacht auf Sequenzen des amerikanischen Genotyps 4 PRRSV ORF1a ORF2 ORF1b ORF4 ORF6 ORF3 ORF5 ORF7 ORF6 ORF4 ORF7 ORF5 Andreyev P420 LV607 Andreyev P620 Oleksiewicz EU ORF5 F Suarez EU ORF5 F Oleksiewicz EU ORF5 R LV981 LV330 Suarez EU ORF5 R ORF 5 ORF 5 EU-type PCR (Oleksiewicz et al., 1998) 719 bp ORF 5 AM-type PCR (Andreyev et al., 1997) 716 bp 5 Zusammenfassung PCR ORF7 Sample No. PCR ORF5 AM seminested PCR ORF5 EU PCR PCR ORF6 EU nested PCR PCR Se 44 394bp (EU) - + SE 53 394bp (EU) - - SE 96 394bp (EU) - + SE 97 394bp (EU) - + Se 521 429bp (AM) + - - - Se 524 429bp (AM) + - - - SE 551 - - - + SE 553 394bp (EU) - + LU 528 394bp (EU) - + Lu 534 429bp (AM) + - - - Lu 536 - - - + - + + + + + + + + + Sequenzen des amerikanischen Genotyps in Österreich 91 Boxmeer 10 NL-3 Arnsberg Lelystad V-502 PRRSv8D 96 64 PRRSv6A Porcilis SE44 84 SE53 PRRSv5A 80 100 H2 PRRSv92V058 PRRSvAV30 100 SE96 90 SE97 66 100 SE551 SE553 85 PRRSv5710 84 Pyrsvac PRRSv5999 100 PRRSv4606 81 As1 LU528 84 LU536 Bie94 99 Bie97 Kwi PRRSv3211 75 PRRSvOLOT PRRSv705 PRRSv2228 PRRSvP035 DK111-92 PRRSv2156 100 Rak Jed Kon 100 V-501 V-503 99 Sid Aus DK5163-23 85 DK5163-17 DK3506-12 56 23317 ATCC VR-2332 MLV RespPRRS PA8 LU534 PRRSV24 ISU1894 81 PRRSV51 69 PRRSV46 SE521 SE524 PRRSV01 100 ISU79 F1 WSV 50 98 NADC-8 IA NADC-9 IA ISU55 PrimePac ISU3927 ONT-TS Kitasato 93-1 EDRD-1 69 CH-1a 24901 GUATEMALA PRRSV21 PRRSV40 PRRSV19 100 MD-001 100 IAF-Klop 85 IAF-BAJ Quebec 807/94 67 93 EU AM LDV 0.1 6 PRRSv2156 Rak Jed Aus V-501 Kon V-503 Sid DK111-92 PRRSv705 PRRSv2228 PRRSvP035 Pyrsvac PRRSv4606 As1 LU528 Bie94 Lelystad Porcilis SE44 SE53 Kwi Boxmeer 10 NL-3 LU536 Bie97 SE96 SE551 SE553 SE97 EU LDV-Plagemann DK3506-12 Quebec 807/94 IAF-BAJ IAF-Klop CH-1a PRRSV19 MD-001 PRRSV40 ATCC VR-2332 MLV RespPRRS LU534 SE521 SE524 NADC-9 IA ISU55 ISU3927 PrimePac ONT-TS AM EDRD-1 Kitasato 93-1 Zusammenfassung • Amerikanische und europäische Genotypen in Österreich • Impfung mit attenuierten amerikanischen Stämmen in Österreich derzeit nicht erlaubt • Zukauf von geimpften Tieren ausländischer Herkunft wahrscheinlich 7 Konsequenzen • Entwicklung von ‚region-tailored‘ Assays • Design von Primern, die beide Genotypen erkennen (ORF 6) • Regelmäßiges Monitoring der vorkommenden PRRSV Sequenzen Danksagung • VUW Wien – Stanislav Indik – Friederich Schmoll – Wolfgang Sipos • VRI Brno – Lubomir Valicek 8
