CO002K pan-B-Cocktail_A1015_Gef
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Pan-B-Cocktail Mouse anti-CD20 and Rabbit anti-Pax-5 Cat. No.: CO002K (1 ml Konzentrat); CO002K-05 (0,5 ml Konzentrat); COG002 (6 ml gebrauchsfertig) Gebrauchsanweisung Zweckbestimmung: Der Antikörper-Cocktail dient der Lokalisierung humaner B-Lymphozyten in Gewebeschnitten von Formalin fixiertem, Paraffin eingebettetem Gewebe. Zum Gebrauch als Forschungreagenz. Spezifikationen: Spezifität: CD20 und Pax-5 Immunogene: Pax-5: Synthetisches Peptid entsprechend dem C-Terminus des humanen Pax-5 Proteins CD20: B-Zellen aus humaner Tonsille Klone: L26 (CD20) und polyklonal (Pax-5) Immunoglobulin Klasse: Maus IgG2a (CD20) und Kaninchen Ig (Pax-5) Spezies-Reaktivität: human+, andere nicht getestet Zusammenfassung und Erklärung: Der Antikörper gegen CD20 reagiert mit einem formalinresitentem Epitop des CD20-Antigens, welches in den meisten B-Lymphozyten gefunden wird. CD20 wird deshalb als Pan-B-Zellmarker bezeichnet. Der Antikörper des Klons L26 gilt als der beste und spezifischste gegenwärtig verfügbare Pan-B-Zell-Antikörper. L26 zeigt keine Kreuzreaktivität mit nicht-lymphatischem Gewebe. Pax-5 (Paired Box 5), auch als BSAP (B Cell Specific Activator Protein) bezeichnet, ist ein nukleärer Marker für BLymphozyten. Das Protein ist in bereits in Pro- und Prä-B-Lymphozyten, aber auch in reifen B-Lymphozyten nachweisbar. In Plasmazellen ist seine Expression stark herunterreguliert. Pax-5 beeinflusst die Expression verschiedener B-Zell spezifischer Marker wie CD19 und CD20. Neuere Untersuchungen haben gezeigt, dass Pax-5 in einigen Fällen eine höhere Spezifität und Sensitivität für BLymphozyten aufweist als CD20 oder CD79a. Dies gilt u.a. auch für DLBCL (Diffuse großzellige B-Zell Lymphome, Torlacovic et al.). Darüber hinaus ist im Zusammenhang mit neuen Therapieansätzen, die CD20 als therapeutisches Target haben, mit dem vermehrten Auftreten CD20 negativer B-Zell-Lymphome nach Therapie zu rechnen (Clarke et al.). Diese können mit Hilfe alternativer Marker wie Pax-5 nachgewiesen werden. Der kombinierte Nachweis von CD20 und Pax-5 macht vor diesem Hintergrund den Nachweis von B-Lymphozyten besonders zuverlässig. CD20 färbt die Zellmembran und gelegentlich auch das Zytoplasma der B-Lymphozyten, Pax-5 dagegen die Kerne. Geliefertes Reagenz: Gemisch aus monoklonalem Maus-Antikörper und polyklonalem Kaninchen-Antikörper in Puffer mit Schutzprotein und Konservierungsstoff zur Stabilisierung im Format: Konzentrat: 1 ml (Kat.Nr. CO002K) Konzentrat: 0,5 ml (Kat.Nr. CO002K-05) Vorverdünnt: 6 ml (Kat.Nr. COG002) Verdünnung des Primärantikörpers: Zytomed Systems konzentrierter Antikörper-Cocktail muss abhängig vom verwendeten Detektionssystem verdünnt werden. Die endgültige Arbeitsverdünnung ist immer vom Anwender zu ermitteln. Sollten andere Detektionssysteme oder Protokolle verwendet werden, so ist eine Validierung durch einen erfahrenen Spezialisten nötig. Empfehlungen von Zytomed Systems finden Sie im Abschnitt „Färbeprotokoll“. Lagerung und Handhabung: Der Antikörper-Cocktail sollte bei 2-8°C gelagert werden ohne ihn weiter zu verdünnen. Wenn Verdünnungen des Antikörper-Cocktails erforderlich sind, sollten diese mit einem geeigneten Verdünnungspuffer (z.B. ZUC025 von Zytomed Systems) angesetzt werden. Der verdünnte Antikörper kann nach Gebrauch bei 2-8°C gelagert werden. Die Stabilität dieser angesetzten Arbeitslösung hängt von verschiedenen Faktoren ab und muss durch geeignete Kontrollen überprüft werden. Der gelieferte Antikörper-Cocktail ist bei Lagerung bei 2-8°C bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar. Der Antikörper darf nicht über das Verfallsdatum hinaus verwendet werden. Positiv- und Negativkontrollen müssen parallel zum Untersuchungsmaterial mitgeführt werden. Wenn eine unerwartete Färbung oder Abweichungen von zu erwartenden Färbeergebnis beobachtet werden, die vermutlich auf den Antikörper zurückzuführen sind, kontaktieren Sie bitte den Hersteller. Stand: 16.10.2015 Rev: A1015 Doc: DB_CO002K_CO002K-05_COG002 Vorsichtsmaßnahmen: Anwendung durch geschultes Fachpersonal. Sicherheitsdatenblätter für das Fachpersonal sind auf Anfrage erhältlich. Tragen Sie Schutzausrüstung, um Augen-, Haut- oder Schleimhautkontakt mit dem Reagenz zu vermeiden. Falls Sie mit dem Reagenz an empfindlicher Stelle in Kontakt kommen, waschen Sie diese mit reichlich Wasser. Eine mikrobiologische Verunreinigung der Reagenzien sollte vermieden werden, da sonst eine unspezifische Färbung auftreten könnte. Zur Stabilisierung werden ProClin 300 und Natriumazid (NaN3) eingesetzt. Natriumazidanreicherungen können in Abflussrohren aus Blei und Kupfer zur Bildung von hoch explosiven Metall-Aziden führen. Um solche Azidanreicherungen in Abflussrohren zu vermeiden, muss nach der Entsorgung mit reichlich Wasser nachgespült werden. Auf Anfrage ist das Sicherheitsdatenblatt für die Reinsubstanzen erhältlich. Färbeprotokoll: Beachten Sie bitte die unten stehenden Empfehlungen für den Antikörper. Berücksichtigen Sie bitte auch die Angaben für das Färbeprotokoll in der Packungsbeilage des von Ihnen verwendeten Detektionssystems. Parameter *Vorbehandlung Zytomed Systems Empfehlungen Citratpuffer pH 6,0 (HIER = thermische Antigen-Demaskierung) (alternativ: EDTA pH 9,0, dies ergibt ein stärkeres Signal, aber gelegentlich auch Hintergrundfärbung) *Kontrollgewebe Tonsille *Gebrauchsverdünnung 1:50 (für Konzentrate) *Inkubationszeit 60 Minuten Zum Nachweis beider Antikörper des Cocktails muss ein Detektionssystem verwendet werden, das Primärantikörper aus der Maus und aus dem Kaninchen erkennt. Bei Verwendung geeigneter Detektionsreagenzien ist auch ein Zweifarb-Nachweis möglich. Qualitätskontrolle Das empfohlene Kontrollgewebe für diese Untersuchung ist Tonsille oder Lymphknoten. Berücksichtigen Sie bitte auch die Packungsbeilage des verwendeten Detektionssystems für generelle Qualitätskontrollmaßnahmen. Fehlersuche: Sollte eine ungewöhnliche Färbung auftreten, so prüfen Sie bitte die Packungsbeilage des Detektionssystems auf eventuelle Hinweise oder kontaktieren Sie den Hersteller. Zu erwartende Resultate Der Antikörper gegen CD20 zeigt ein positives Ergebnis in der Zellmembran, z.T. auch im Zytoplasma von BLymphozyten in Formalin-fixiertem, Paraffin-eingebettetem Gewebe. Der Antikörper gegen Pax-5 färbt die Kerne von B-Lymphozyten. Die Interpretation der Färbeergebnisse liegt in der Verantwortung des Anwenders. Jedes Experiment sollte durch eine medizinisch etablierte Methode oder durch ein diagnostisches Produkt verifiziert werden. Grenzen der Methode: Die Immunhistochemie ist eine komplexe Methode, in der histologische sowie immunologische Detektionsmethoden kombiniert werden. Die Gewebeverarbeitung und die Handhabung der Proben vor der eigentlichen Immunhistologie können zu ungenauen Ergebnissen führen (Nadji and Morales, 1983). Die endogene Peroxidase Aktivität, die Pseudoperoxidase Aktivität in Erythrozyten oder der endogene Biotingehalt können abhängig vom verwendeten Detektionssystem unspezifische Färbungen verursachen. Eine unzureichende Gegenfärbung oder falsches Eindecken können die Interpretation der Ergebnisse beeinflussen. Zytomed Systems garantiert, dass das Produkt bei korrekter Lagerung und Handhabung bis zum Ablauf des Haltbarkeitsdatums allen beschriebenen Anforderungen entspricht. Darüber hinaus gehende Garantien können nicht gegeben werden. Leistungsdaten: Zytomed Systems hat Studien hinsichtlich der Leistung des Antikörper-Cocktails in Kombination mit einem Standard-Detektionssystem durchgeführt. Alle Produkte wurden als sensitiv und spezifisch hinsichtlich der nachzuweisenden Antigene beurteilt. Es wurde keine signifikante Kreuzreaktivität beobachtet. Literatur: Torlakovic E et al. Am J Surg Pathol 26:1343-1350, 2002 Clarke LE et al. J Cutan Pathol 30:459-462, 2003 Stand: 16.10.2015 Tiacci E et al. Cancer Res 64:7399-7404, 2004 Stein H. Immunität und Infektion, 4:52-69, 95-109, 1976. Rev: A1015 Doc: DB_CO002K_CO002K-05_COG002 Erläuterung der auf dem Produktetikett verwendeten Symbole: Bestellnummer Catalog Number Reference du catalogue Verwendbar bis Use By Utiliser jusque Chargenbezeichnung Batch Code Code du lot Lagerungstemperatur Temperature Limitation Limites de température In vitro Diagnostikum In Vitro Diagnostic Medical Device Dispositif médical de diagnostic in vitro Achtung Warning Attention Gebrauchsanweisung beachten Consult Instructions for use Consulter les instructions d'utilisation RUO Nur für Forschungszwecke For Research Use Only Pour la recherche uniquement Hersteller / Manufacturer / Fabricant Zytomed Systems GmbH • Anhaltinerstraße 16 14163 Berlin, Germany • Tel: (+49) 30-804 984 990 www.zytomed-systems.de
