Power Point Präsentation

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Immunologische Laboruntersuchung bei Tumorpatienten
9. November 2016
Dr. med. Volker von Baehr
Institut für Medizinische Diagnostik Berlin
www.imd-berlin.de
Unspezifisches Immunsystem
(angeboren)
Spezifisches Immunsystem
(erworben, lernfähig)
Immunzellen
Monozyten  Gewebemakrophagen
Granulozyten
- Neutrophile (PMN)
- Eosinophile
- Basophile
T-Lymphozyten
CD4-Lymphozyten
(Helferzellen)
TH1-Helferzellen
Mastzellen
Natürliche Killerzellen
TH2-Helferzellen
CD25+/CD127- Treg-Zellen
CD8-Lymphozyten
CD8+CD28+ zytoxische
T-Zellen (CTL)
CD8+CD28suppressorische T-Zellen
TH17-Helferzellen
B-Lymphozyten
Humorales Immunsystem
Defensine
Opsonine
Komplementsystem
Antikörper
Jede Körperzelle wird permanent vom Immunsystem
kontrolliert.
Zellen die „bekannte“ körpereigene Antigene präsentieren,
werden nicht angegriffen, weil die entsprechenden TLymphozyten in der Reifungsphase negativ selektioniert
wurden
CD4 TH1
CD8+
CD28+
Intaktes zelleigenes Protein
Jede Körperzelle wird permanent vom Immunsystem
kontrolliert.
Zellen die „bekannte“ körpereigene Antigene präsentieren,
werden nicht angegriffen, weil die entsprechenden TLymphozyten in der Reifungsphase negativ selektioniert
wurden
CD4 TH1
CD8+
CD28+
Intaktes zelleigenes Protein
Infizierte Zellen werden vom Immunsystem in der
Akutphase erkannt .........
CMV-Virus
CD4 TH1
CD8+
CD28+
IFN-g
Perforine
Granzyme
... und angegriffen
CMV-Virus
IFN-g
Perforine
Granzyme
CD4 TH1
CD8+
CD28+
IFN-g
Perforine
Granzyme
... aber in der chronischen Phase in der Regel toleriert
CMV-Virus
CD4
Treg
IFN-g
Perforine
Granzyme
TGF-b
IL-10
CD4 TH1
CD8+
CD28+
IFN-g
Perforine
Granzyme
Das gleiche passiert bei Tumorzellen
CD4 TH1
CD8+
CD28+
Transformation
IFN-g
Perforine
Granzyme
Die Tumorzelle wird im Idealzustand eliminiert
IFN-g
Perforine
Granzyme
CD4 TH1
CD8+
CD28+
Transformation
IFN-g
Perforine
Granzyme
.... oder nicht, wenn Treg-Zellen diese Immunantwort
verhindern
IFN-g
Perforine
Granzyme
CD4
Treg
TGF-b
IL-10
CD4 TH1
CD8+
CD28+
Transformation
IFN-g
Perforine
Granzyme
Unspezifisches Immunsystem
(angeboren)
Spezifisches Immunsystem
(erworben, lernfähig)
Zelluläres Immunsystem
Monozyten  Gewebemakrophagen
Granulozyten
- Neutrophile (PMN)
- Eosinophile
- Basophile
T-Lymphozyten
CD4-Lymphozyten
(Helferzellen)
TH1-Helferzellen
Mastzellen
Natürliche Killerzellen
TH2-Helferzellen
CD25+/CD127- Treg-Zellen
CD8-Lymphozyten
CD8+CD28+ zytoxische
T-Zellen (CTL)
CD8+CD28suppressorische T-Zellen
TH17-Helferzellen
B-Lymphozyten
Humorales Immunsystem
Defensine
Opsonine
Komplementsystem
Antikörper
Der „übliche“„Immunstatus“ ist wenig hilfreich
Er muss Tumorstatus-spezifische Marker berücksichtigen
Thymusreserve = Anteil CD31+ naiver CD4-Zellen
Der Anteil an CD31+ T-Zellen widerspiegelt den
Nachschub naiver T-Zellen aus dem Thymus
CD31+ T-Zellen = RTE = recent thymic emigrants; Thymusemigranten)
Thymus
CD45RA
Blutkreislauf
CD31
CD4
CD45RA
zentrale
naive T-Zelle
Verlust von CD31
CD45RO
CD4
RTEnaive T-Zelle
CD4
Effektor/Memory
T-Zelle
Regulatorische T-Zellen (v.a. Anteil CD39+)
Regulatorische T-Zellen wirken immunsuppressiv
Hemmung über immunsuppressive Zytokine
Auslösung von T-Zell-Apoptose
Entzug von IL-2
Hemmung dendritischer Zellen
CD39+ Treg-Zellen sind die „bösesten Buben“
Dendritische
Zellen
Makrophagen
Antigenpräsentation 
Immunsuppression
T-Zellen
NK-Zellen
Apoptose 
Zytotoxizität 
CD39 = Ectonucleotidase (Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 (ENTPD1)
VEGF = Vascular Endothelial Growth Factor
Bastid et al., Oncogene 2013
Vaskularisation 
Welche Bedeutung haben die CD39+ Treg-Zellen ?
TGF-b ist hinweisend auf die Funktion der Treg-Zellen
NEU
Wie ist der CD28-Status ?
Liegt schon eine Immunaktivierung vor ?
Oberflächenmoleküle zeigen die T-Zellaktivierung an
Interleukin-2
regt Zellteilung an
Prämitotisch
Expression der a-Kette
des IL-2 Rezeptors = CD25
 Zellteilung
 T-Zell-Präaktivierung
Postmitotische
Expression des
Moleküls HLA-DR
 persitierende
Expression auf
aktivierten Effektorzellen
IP-10 – ein Serummarker für die TH1-Immunaktivierung
(IP-10 = IFN-g-inducible protein 10)
Die IP-10/TGF-b-Ratio beachten !
Anstieg: Stärkung der systemischen zytotoxischen Immunantwort
Abfall: ungünstige Prognose ! → Änderung der Therapie
IP-10 – ein Serummarker für die TH1-Immunaktivierung
(IP-10 = IFN-g-inducible protein 10)
aktivierte
TH1-CD4-Zelle
IFN-g
IP-10
sehr niedrige und
schwankende
Serumspiegel
stabil im Serum
messbar
IP-10 – ein Serummarker für die TH1-Immunaktivierung
(IP-10 = IFN-g-inducible protein 10)
aktivierte
TH1-CD4-Zelle
IFN-g
IP-10
sehr niedrige und
schwankende
Serumspiegel
stabil im Serum
messbar
IP-10-Spiegel
im Blut
pg/ml im Serum
IFN-g
Stunden
Tage
Wir haben drei „Entzündungssysteme“
Sinnvoll für die Tumorabwehr ist nur eines davon
Bakterien
Makrophage
LPS
Pilze
TNF-a
IL-1
IL-6, IL-8
IL-10, TGF-b
Partikel
Xenobiotika
Monozytäre/
Makrophagozytäre
Entzündung
CRP
Immunkomplexe
Viren
intrazellulär
persistierende
Bakterien
T-Lymphozyt
IFN-g
IL-17
IL-2
IL-4
IL-10
Tumorzellen
Lymphozytäre
Entzündung
(Immunaktivierung)
Allergene
(bei Sensibilisierung)
Bakterien
Pilze
Xenobiotika
Mastzelle
Histamin
Leukotriene
TGF-b
Serotonin
TNF-a u.a.
Entzündung durch
Mastzellaktivierung,
„allergische
Entzündung“
Immunaktivierung = Immunkompetenz
?
Der Anstieg von TNF-a und sIL2R im Serum bei
Tumorpatienten ist tendentiell eher mit schlechterer
T-Zellfunktion assoziiert
27 Patienten (34-82 Jahre, mean 62 Jahre) mit soliden Tumoren
MFI im LTTFU
MFI im LTTFU
25
25
20
20
Korrelationskoeffizient r= -0,34
Korrelationskoeffizient r= -0,32
15
15
10
10
5
5
0
0
0
10
20
30
TNF-a im Serum
40
50
0
1000
2000
3000
4000
sIL2R im Serum
5000
6000
Hier ist eine ungezielte Immunstimulation falsch !
Der quantitative Immunstatus macht aber kaum
Aussagen zur Funktionalität der Immunzellen!
Immunfunktionsanalysen
T-Lymphozyten
 LTT-Immunfunktion
NK-Zellen
 NK-Zell-Funktionstest
Granulozyten
 Phagozytosetest
Respiratory Burst Test
B-Lymphozyten
 IgG, IgA, IgM im Serum
Komplement
 Komplementteste CH50 und AP50
Der CH100-Test sollte nicht mehr durchgeführt werden !
LTT Immunfunktion (T-lymphozytäre Funktion)
LTT Immunfunktion + Präparateuntersuchung
Die Zahl der NK-Zellen im Blut ist (fast) ohne
Bedeutung
... aber die NK-Zellfunktion
Funktion 
Stimulierbarkeit 
Auch für die NK-Zellen ist eine intakte Funktion der
T-Helferzellen essentiell
Von NK-Zellen
sezernierte Zytokine
CD4
TH1
Makrophagen/
Dentritische
Zellen
Aktivatoren
IL-2
IL-12
IL-15
IL-18
IFN-g
IFN-a
IFN-b
IFN-g
TNF-a
GM-CSF
IL-2
NK
Von NK-Zellen
sezernierte
Effektorzellmoleküle
Perforin
Granzyme
FAS-Ligand
TRAIL
Eine TH2-Dominanz ist kontraproduktiv, weil dann die
TH1-Hilfefunktion für T- und NK-Zellen fehlt
Achtung:
IFN-g und IL-4 werden hier nicht im Blut bestimmt sondern ev vivo
nach Mitogenstimulation der Patientenzellen
TH1-Modulatoren können im Labor vorselektiert werden !
TH1-Modulatoren können im Labor vorselektiert werden !
Lässt sich mit einem Labortest seriös
vorhersagen, welche Präparate die NK-Zellen
eines individuellen Patienten aktivieren können?
Negativkontrolle
Positivkontrolle
In diesem Fall zeigen Biobran und Latensin einen deutlichen Effekt
Negativkontrolle
Positivkontrolle
In diesem Fall zeigen Biobran und Latensin einen deutlichen Effekt
Basistherapie bei Tumorpatienten
1.
Kontrolle und Ausgleich der essentiellen
Spurenelemente (Mineralstoffe)
... weil > 200 Enzyme allein im Immunsystem und antioxidativen
Schutzsystem als Metalloenzyme von ihnen abhängig sind
Basistherapie bei Tumorpatienten
2.
Ausgleich eines intrazellulären Glutathionmangels
... weil ohne antioxidativen Schutz eine aktivierte Immunzelle
nicht „arbeitsfähig“ ist.
Was bedeutet „intrazellulär“
1. … zu leicht gemacht
Zentrifugation
des Blutes
Dekantieren
des flüssigen
Blutanteiles
Lyse des
Blutkuchens
Glutathionbestimmung
mittels ELISA-Test
Keine echte „intrazelluläre“ Messung, weil 10% Serum verbleiben und
zellgebundenes Glutathions mit erfasst wird.
 Keine exakte Aussage über intrazelluläre Spiegel
Richtige Bezeichnung wäre „intraerythrozytär“
Was ist wirklich „intrazellulär“
T-Lymphozyten
Zytofluorometrische
Analyse der Blutzellen
Monozyten
NK-Zellen
Warum Bestimmung in 3 Zellpopulationen getrennt?
Nur in Lymphozyten erniedrigt?
„Verbrauch“ bei normaler Synthese(fähigkeit)
In Lymphozyten und Monozyten vermindert?
„verminderte Synthese“ und nicht nur „Verbrauch“
NK-Zellen ?
besondere Bedeutung bei Tumorpatienten
Zusammenfassung
TGF-b – sollte möglichst niedrig sein
IP-10 als TH1-Marker - Anstieg unter Immunstimulation vorteilhaft
Der Anstieg des sIL2R, TNF-a, IL-6 sind eher Indikatoren
einer unspezifischen Entzündung welche die T-Zellfunktion
negativ beeinflusst.
TH1/TH2-Balance sollte möglichst ausgeglichen oder
TH1-dominant sein
Glutathion (wirklich) intrazellulär messen und ausgleichen
Essentielle Spurenelemente im Vollblut messen und substituieren
Unter immunstimulierender Behandlung sollten die
Treg-Zellen und der CD39+ Anteil nicht ansteigen !
Nächste online-Fortbildung am
30. November 2016, 15:00 Uhr
Bedeutung der Zytokindiagnostik
bei Tumorpatienten
Dr. Cornelia Doebis
Institut für Medizinische Diagnostik Berlin
Institut für Medizinische Diagnostik Berlin-Potsdam
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